中文名称:近红外荧光素Cy5标记5′-核苷酸酶
英文名称:Cy5-5′-NT
纯度:98%
包装:mg级和g级
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
储存时间:1年
保存:冷藏
温馨提醒:仅供科研,不能用于人体实验
. 5′-核苷酸酶的特性
5′-核苷酸酶是一种酶,负责水解核苷酸的5′磷酸基团,从而生成核苷和无机磷酸。其在细胞代谢中起着重要作用,标记后可用于观察其在生物体系中的行为。
2. Cy5荧光染料的选择
Cy5-NHS酯:这种形式的Cy5具有活性基团(NHS),能够与5′-核苷酸酶的氨基反应,形成稳定的酰胺键。
3. Cy5与5′-核苷酸酶的共价连接
反应步骤:
缓慢添加Cy5-NHS酯到5′-核苷酸酶溶液中,同时轻轻搅拌以确保充分混合。
在室温下反应通常持续4-24小时,具体时间可根据需要进行调整。
酶的准备:将5′-核苷酸酶溶解在适当的缓冲液中(如PBS,pH 7.4),使其浓度适中。
标记反应:
终止反应:使用透析、HPLC或柱层析去除未反应的Cy5,以获得纯化的Cy5-5′-核苷酸酶。
4. 纯化与表征
纯化:通过透析、HPLC或柱层析去除未反应的Cy5和酶,得到纯化的Cy5-5′-核苷酸酶。
表征:
UV-Vis光谱:确认Cy5的存在及其标记效果。
荧光光谱:检测Cy5的荧光特性,以确保标记成功。
质谱(MS)和核磁共振(NMR):确认复合物的结构。
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