荧光素Cy7.5标记枸杞多糖 是一种研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)在体内分布和代谢的有用方法,特别是在近红外成像应用中。
实验步骤
枸杞多糖溶解:
将枸杞多糖溶解在PBS缓冲液中,浓度大约为1-10 mg/mL。轻微加热(37°C)可能有助于多糖的完全溶解。
Cy7.5染料溶解:
Cy7.5染料需首先溶解在少量DMSO或DMF中,浓度约为1-5 mM。由于Cy7.5染料的水溶性较差,建议使用有机溶剂进行溶解。
标记反应:
将Cy7.5染料缓慢加入到枸杞多糖溶液中,确保充分混合。该反应通常在pH 8.0-8.5的碳酸氢钠缓冲液中进行,以促进染料与多糖的共价结合。反应时间通常为2-4小时,室温下进行。
纯化:
反应完成后,通过透析法去除未反应的Cy7.5染料。使用适当分子量截断(如3 kDa或10 kDa)的透析袋,并在PBS缓冲液或去离子水中透析12-24小时,每隔数小时更换透析液。
表征产物:
使用紫外-可见光谱和荧光光谱验证标记产物。Cy7.5的吸收峰位于750 nm左右,发射波长约为780 nm。通过这些数据可以确定Cy7.5是否成功标记到枸杞多糖上。
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