近红外荧光素Cy7.5标记肌动蛋白多聚体F-actin 是一种用于研究肌动蛋白纤维（F-actin）的技术。通过将Cy7.5这种近红外荧光染料标记在F-actin上，可以在活体或体外实验中观察肌动蛋白的动态变化和分布。

实验步骤

材料

1. F-actin多聚体：从肌动蛋白G-actin（单体）诱导聚合生成F-actin纤维。

2. Cy7.5染料：例如Cy7.5-NHS酯或Cy7.5-马来酰亚胺，选择与肌动蛋白上的赖氨酸或其他可反应基团共价结合的形式。

3. ATP：用于维持肌动蛋白纤维的聚合状态。

4. 反应缓冲液：如肌动蛋白缓冲液（含ATP、Mg²⁺和K⁺），保持肌动蛋白的稳定性。

5. 纯化工具：如超速离心设备，用于分离标记后的F-actin纤维。

实验流程

1. F-actin多聚体制备：

• 将G-actin溶解在G-肌动蛋白缓冲液（含ATP和Ca²⁺）中，并通过加入K⁺或Mg²⁺诱导肌动蛋白单体聚合为F-actin。通常在室温下孵育30分钟到1小时。

2. Cy7.5染料的准备：

• 将Cy7.5-NHS酯溶解在DMSO或DMF中，浓度为1-5 mM，并确保充分溶解。Cy7.5具有较强的亲脂性，需要小心操作以防止自发聚集。

3. 标记反应：

• 将Cy7.5染料缓慢加入到F-actin溶液中。该反应通常在0°C至4°C的低温环境中进行，以防止肌动蛋白纤维解聚。反应时间为2-4小时，确保充分反应。

• 标记反应的pH应保持在7.0-8.0之间，以确保Cy7.5染料与F-actin中的赖氨酸残基或其他可反应基团的共价结合。

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