cDNA片段亚克隆至哺乳动物细胞高表达型穿梭载体中，定制服务

将 cDNA 片段亚克隆至哺乳动物细胞高表达型穿梭载体是实现基因在哺乳动物细胞中高效表达和功能研究的重要途径。

首先，要获得**的 cDNA 片段。这可能是通过从特定组织或细胞中提取总 RNA，然后利用反转录酶将其反转录为 cDNA。在反转录过程中，要使用合适的引物，如 Oligo (dT) 引物或随机引物，以确保能够全面地合成 cDNA。同时，要注意避免 RNA 的降解和反转录反应条件的优化，如合适的温度、缓冲液和 dNTP 浓度等。

选择合适的哺乳动物细胞高表达型穿梭载体是关键。这种载体需要具备多个有利于在哺乳动物细胞中表达的元件。例如，具有强启动子，如 CMV 启动子或 EF - 1α 启动子，能够驱动 cDNA 片段在细胞中的高效转录。同时，载体还应包含增强子元件，可进一步提高基因表达水平。此外，为了便于筛选，载体上有选择标记基因，如绿色荧光蛋白基因（GFP）或抗生素抗性基因（如嘌呤霉素抗性基因）。

在进行亚克隆之前，要对 cDNA 片段和穿梭载体进行处理。通常使用限制酶对两者进行酶切，根据 cDNA 片段两端的序列和穿梭载体上的多克隆位点选择合适的限制酶。例如，如果 cDNA 片段两端有 SalI 和 NotI 酶切位点，而穿梭载体的多克隆位点也有这两个位点，就使用这两种酶进行酶切。酶切后的 cDNA 片段和载体通过 DNA 连接酶进行连接，形成重组质粒。

连接产物通过转染方法导入哺乳动物细胞，如利用脂质体转染试剂。转染后，根据载体上的选择标记进行筛选。

齐岳生物生物提供基因敲入细胞定制服务，荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等均可实现。我们提供其定制服务，包括多种类型的细胞基因KI和全流程的服务支持。

产品：

gRNA和Cas9共表达载体

gRNA和Cas9共表达载体  质粒载体

gRNA和Cas9共表达载体 AAV病毒载体（表达单SagRNA）

gRNA和Cas9共表达载体 PiggyBac转座载体

gRNA和Cas9共表达载体 慢病毒载体

gRNA和Cas9共表达载体 腺病毒载体

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。