sgRNA质粒克隆，定制服务

sgRNA（单向导 RNA）质粒克隆在 CRISPR/Cas9 基因编辑技术中起着核心作用。

设计 sgRNA 序列是第一步，它需要与目标基因的特定 DNA 序列互补。sgRNA 由 crRNA（CRISPR RNA）和 tracrRNA（反式激活 CRISPR RNA）融合而成，其特异性取决于与目标 DNA 序列的碱基配对。通过生物信息学工具分析目标基因的基因组序列，选择合适的 20bp 左右的序列作为 sgRNA 的靶向序列，同时要考虑其特异性和脱靶效应，尽量避免在基因组其他位置有相似的匹配序列。

合成 sgRNA 寡核苷酸后，进行退火形成双链结构，这一过程与 shRNA 类似，在合适的缓冲液中通过温度变化使两条互补链结合。

对于质粒载体的选择，要考虑到 CRISPR/Cas9 系统的要求。载体通常包含 Cas9 基因表达框和 sgRNA 表达框。Cas9 基因表达框具有合适的启动子（如 CMV 启动子等）来驱动 Cas9 蛋白在细胞中的表达，而 sgRNA 表达框则有 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子（如 U6 启动子）来驱动 sgRNA 的转录。此外，载体上还有选择标记，如嘌呤霉素抗性基因或新霉素抗性基因等，用于筛选转染成功的细胞。

对载体进行酶切，根据 sgRNA 插入位点的设计，选择合适的限制酶。酶切反应要在严格的条件下进行，包括合适的缓冲液和温度，保证酶切位点的准确性，使载体在特定位置切开，产生与 sgRNA 双链匹配的末端。

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

产品：

Human Epigenetic Genes KO Library

Human Ubiquitination-related Genes KO Library

Ifi47的过表达质粒

IGF-1过表达质粒

iPS、H1、H9等细胞的基因敲除/点突变/敲入

Jaggedl真木亥表达质粒构建

kb级大片段DNA的基因组精准编辑

L929细胞敲除RIPK1基因

lncRNA过表达载体 pGM-T-H19

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。