miRNA质粒克隆，定制服务

miRNA（微小 RNA）质粒克隆是研究 miRNA 功能和调控机制的重要手段。

首先，获取 miRNA 序列信息。可以从已有的数据库或文献中查找目标 miRNA 的序列，或者通过实验方法（如深度测序等）从特定组织或细胞中鉴定新的 miRNA 序列。miRNA 通常长度较短，约 20 - 25bp。

在克隆过程中，选择合适的质粒载体是关键。对于 miRNA 克隆，载体需要具备在细胞中有效表达 miRNA 的元件。一种常见的方法是使用基于 RNA 聚合酶 Ⅱ 启动子的载体，因为许多 miRNA 在体内是由 RNA 聚合酶 Ⅱ 转录的。载体上还应包含合适的选择标记，如氨苄青霉素抗性基因或绿色荧光蛋白（GFP）基因等。如果有 GFP 基因，可以通过荧光观察来初步判断转染情况。

对 miRNA 和质粒载体进行处理。可以通过化学合成 miRNA 寡核苷酸，或者从基因组 DNA 中扩增包含 miRNA 前体序列的片段。如果是合成寡核苷酸，需要将其退火形成双链或具有合适二级结构的形式。对于载体，使用限制酶进行酶切，根据 miRNA 序列和载体多克隆位点的情况选择合适的酶。例如，如果 miRNA 两端有 EcoRI 和 HindIII 酶切位点，且载体的多克隆位点也有这两个位点，就使用这两种酶进行双酶切。

将处理后的 miRNA 与酶切后的载体连接。利用 DNA 连接酶将它们连接在一起，注意调整 miRNA 和载体的摩尔比，以提高连接效率。连接产物通过转化导入宿主细胞，如大肠杆菌。在含有相应抗生素的培养基上培养转化后的细胞，筛选出含有重组质粒的菌落。

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

产品：

MALAT1 过表达质粒 (pcDNA3.1-MALAT1)

MCF-7细胞过表达线粒体融合素基因-2(Mfn2)

MDM2截短体真核表达载体

METH1基因截短体的构建

MicroRNA抑制表达稳转细胞系构建服务

miR-122过表达质粒载体

miR-122过表达转基因小鼠质粒构建

miRNA、lncRNA表达载体构建

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。