建立shRNA敲低稳转株,定制服务
建立 shRNA 敲低稳转株是一个系统性的过程,设计和合成 shRNA 序列。依据目标基因的序列信息,利用专业的生物信息学工具确定合适的靶点。靶点的选择要综合考虑其在基因中的位置、特异性以及潜在的脱靶风险。一般选择基因的编码区或靠近 3'UTR 的区域,设计出具有高度特异性的 shRNA 序列。这些序列在合成后要经过严格的质量检测,确保其纯度和完整性,为后续构建载体做好准备。
接着是构建 shRNA 表达载体。根据实验的细胞类型和研究目的选择合适的载体骨架。例如,如果是在哺乳动物细胞中进行实验,选择具有在哺乳动物细胞中高效表达元件的载体,如含有合适启动子(如 CMV 启动子或 U6 启动子)、增强子和 poly (A) 信号的载体。将合成的 shRNA 序列克隆到载体的多克隆位点上,这一过程需要使用限制酶和连接酶进行精确的操作。在构建完成后,通过测序等方法验证 shRNA 序列在载体中的正确插入,保证载体的质量。
然后是将 shRNA 表达载体导入目标细胞。根据细胞的特性选择合适的转染方法,如对于一些容易转染的细胞系,可以使用脂质体转染法;而对于一些较难转染的细胞,电穿孔转染可能是更好的选择。在转染过程中,要优化转染条件,包括转染试剂的浓度、载体 DNA 的量、细胞密度以及转染的时间和温度等参数。例如,在脂质体转染过程中,要通过预实验确定**的脂质体与 DNA 的比例,以提高转染效率。
齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
产品:
shRNA基因敲低稳转株构建
shRNA基因敲低细胞稳转株
shRNA慢病毒质粒的构建
shRNA敲减慢病毒
shRNA敲减细胞株
shRNA文库构建
shRNA载体构建
shRNA真核表达载体构建
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
厂家:西安齐岳生物
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。