构建shRNA表达载体，定制服务

构建 shRNA 表达载体是实现基因沉默研究的关键步骤，以下是详细描述：

首先，设计 shRNA 序列。这需要依据目标基因的信息来进行。通过生物信息学分析目标基因的 mRNA 序列，选择合适的 19 - 29bp 的片段作为靶向序列。此序列应具有高度特异性，避免与其他非目标基因的 mRNA 有过多同源性，以减少脱靶效应。例如，对于一个已知功能的基因，可选择其编码区或 3'UTR 区域中保守的序列。同时，要考虑所设计的 shRNA 形成发夹结构的能力，包括茎环长度和序列的合理性。

接着准备载体。一般选择合适的质粒载体，如基于 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子（如 U6 或 H1 启动子）的载体，它们能有效驱动 shRNA 在细胞内的转录。载体还需具备合适的多克隆位点（MCS）方便插入 shRNA 序列，同时有选择标记（如氨苄青霉素抗性基因）用于后续筛选含有重组载体的宿主细胞。

在合成 shRNA 寡核苷酸时，要确保其质量和纯度。通常是合成两条互补的寡核苷酸链，一条链包含与目标基因互补的序列、环序列和部分反向互补序列，另一条则是其完全互补链。合成后，将两条寡核苷酸链进行退火处理，在合适的缓冲液中，通过加热到特定温度（如 95℃）然后缓慢冷却，使它们形成双链结构，即具有发夹结构的 shRNA。

然后对载体进行酶切。根据 shRNA 序列和载体 MCS 的情况，选择合适的限制酶。例如，如果 shRNA 两端设计为有 EcoRI 和 HindIII 酶切位点，且载体的 MCS 也包含这两个位点，就使用这两种酶对载体进行双酶切。酶切反应要在适宜的缓冲体系下，于特定温度（一般 37℃）下进行一定时间，确保酶切完全，使载体在 MCS 处切开，产生与 shRNA 匹配的粘性末端或平末端。

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

产品：

SRPK1过表达转基因质粒载体

STAT3过表达质粒载体

Tag标签敲入（无痕敲入）

TALEN基因敲除小鼠

Tet-On诱导表达辅助载体

Tet调控转录因子表达载体 质粒载体

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。