利用短发夹核糖核酸(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒构建基因敲减质粒(VARS-sh组),定制服务
通过对 VARS 基因的 mRNA 序列进行全面分析,利用生物信息学软件确定合适的靶点。选择在 VARS 基因中具有高度特异性的区域,可优先考虑基因的编码区或 3'UTR 部分,这些区域对于基因表达调控较为关键。同时,要避免所选序列与其他基因有过多的同源性,以减少脱靶效应。例如,在 VARS 基因编码特定蛋白结构域的 mRNA 区域选取长度约为 20bp 的序列作为 shRNA 的靶向序列。
设计好 shRNA 序列后,合成两条互补的寡核苷酸链。一条链包含与 VARS 基因 mRNA 互补的序列、环序列(如 TTCAAGAGA)和部分反向互补序列,另一条链则是其完全互补链。将这两条链在合适的缓冲液中进行退火处理,加热至 95℃左右,然后缓慢冷却,形成具有发夹结构的双链 shRNA。
选择合适的质粒载体来构建基因敲减质粒。质粒载体需要具备一些关键元件,包括启动子、多克隆位点(MCS)和选择标记。对于 shRNA 的表达,常选择 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子,如 U6 启动子,它能有效驱动 shRNA 在细胞内的转录。MCS 要方便 shRNA 序列的插入,其酶切位点应与 shRNA 两端设计的酶切位点相匹配。
齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
产品:
构建shRNA表达载体
构建tead4敲减慢病毒载体
构建Tiam1基因的截短体原核表达重组质粒
构建ZFD(氨基酸137-176)单结构域缺失的截短体质粒
构建表达载体(过表达,敲除或者敲低)
构建的ALB敲除的 HepG2 细胞系 (HepG2-AKO)
构建定点突变疾病模型
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
厂家:西安齐岳生物
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。