抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建,定制服务
设计针对 GFP 基因的 shRNA(短发夹 RNA)序列。通过对 GFP 基因 mRNA 序列的分析,确定合适的靶点。由于 GFP 基因序列是已知的,可选择在其编码区或 3'UTR 部分的特定序列作为靶点,长度一般在 19 - 29bp。要确保所选靶点与 GFP 基因特异性结合,同时避免与其他无关基因的同源性,以减少脱靶效应。例如,可选取 GFP 基因中一段保守且独特的 20bp 序列作为 shRNA 的靶向序列。
设计好 shRNA 序列后,合成两条互补的寡核苷酸链。一条链包含与 GFP 基因 mRNA 互补的序列、环序列(如 TTCAAGAGA)和部分反向互补序列,另一条链是其完全互补链。将这两条寡核苷酸链在合适的缓冲液中进行退火处理,通过加热至约 95℃后缓慢冷却,形成具有发夹结构的双链 shRNA。
选择合适的载体用于构建抑制 GFP 表达的载体。常用的载体包含启动子、多克隆位点(MCS)和选择标记等元件。可选择具有 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子(如 U6 启动器)的载体,因为它能有效驱动 shRNA 的转录。MCS 要与 shRNA 两端设计的酶切位点相匹配,方便 shRNA 的插入。选择标记通常是抗生素抗性基因,如氨苄青霉素抗性基因,用于筛选含有重组载体的宿主细胞。
齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
产品:
基于AsCas12a的CRISPRi功能基因组学平台
基于CRISPR/Cas9技术的高通量筛选平台
基于CRISPR/Cas9技术的水稻千粒重基因tgw6突变体的创建
基于CRISPR/Cas9技术的水稻转录因子突变体的创建
基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
厂家:西安齐岳生物
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。