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慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白,定制服务
发布时间:2024-11-06     作者:axc   分享到:

慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白,定制服务

构建含有 GFP 基因的表达载体。选择适合成纤维细胞的载体,载体需要具备合适的启动子。对于成纤维细胞,可选择一些在成纤维细胞中有较好活性的启动子,如 SV40 启动子或 COL1A2 启动子(如果是针对特定类型的成纤维细胞,如与胶原蛋白合成相关的成纤维细胞)。载体还应包含多克隆位点(MCS)用于插入 GFP 基因和选择标记(如新霉素抗性基因)。

将 GFP 基因插入到表达载体中。如果 GFP 基因通过 PCR 扩增获得,要使用高保真 DNA 聚合酶,并根据 GFP 基因的序列和载体 MCS 的酶切位点设计合适的引物。扩增后的 GFP 基因和载体分别进行酶切,然后利用 DNA 连接酶将 GFP 基因与酶切后的载体连接,形成重组 GFP 表达载体。

将重组 GFP 表达载体导入成纤维细胞。根据成纤维细胞的类型和特点选择合适的转染方法。脂质体转染是一种常用的方法,对于原代成纤维细胞或一些难转染的成纤维细胞系,可以尝试电穿孔转染等方法。在脂质体转染过程中,要优化转染试剂与 DNA 的比例、细胞密度等参数。例如,对于原代皮肤成纤维细胞,通过预实验确定**的脂质体和 DNA 的用量,以提高转染效率。

转染后的成纤维细胞需要进行筛选以获得稳定表达 GFP 的细胞群体。利用载体上的选择标记,在含有相应抗生素(如新霉素)的培养基中培养细胞。

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用途:科研

状态:固体/粉末/溶液

保存:冷藏

厂家:西安齐岳生物


注意事项:

本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。



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