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大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建,定制服务
发布时间:2024-11-06     作者:axc   分享到:

大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建,定制服务

选择合适的载体来构建 RNA 干扰载体。对于大鼠基因研究,常用的载体有质粒载体和病毒载体。如果选择质粒载体,要考虑其在大鼠细胞中的适用性。质粒载体通常包含启动子、多克隆位点(MCS)和选择标记等元件。对于 RNA 干扰应用,可选择 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子,如 U6 或 H1 启动子,它们能有效驱动干扰序列的转录。MCS 用于插入我们合成的双链 RNA 干扰序列,其酶切位点要与双链 RNA 两端设计的酶切位点相匹配。选择标记一般是抗生素抗性基因,如氨苄青霉素抗性基因或卡那霉素抗性基因,用于筛选含有重组载体的宿主细胞。

对载体进行酶切,根据双链 RNA 干扰序列和载体 MCS 的设计,选择合适的限制酶。例如,如果双链 RNA 两端设计有 EcoRI 和 HindIII 酶切位点,且载体 MCS 也包含这两个位点,就使用这两种酶对载体进行双酶切。酶切反应在适宜的缓冲体系下,于 37℃进行,确保酶切完全,使载体在 MCS 处切开,产生与双链 RNA 匹配的粘性末端或平末端。

将退火后的双链 RNA 与酶切后的载体进行连接。利用 DNA 连接酶(如 T4 DNA 连接酶)在 ATP 存在下,将双链 RNA 与载体连接,形成大鼠基因 RNA 干扰载体。连接时要注意双链 RNA 与载体的摩尔比,一般为 3 - 5:1,以提高连接效率。连接产物通过转化大肠杆菌,在含有相应抗生素的培养基上筛选阳性克隆,再通过菌落 PCR、测序等方法验证双链 RNA 是否正确插入载体,确保构建的 RNA 干扰载体能够准确有效地干扰目标大鼠基因的表达。

大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建,定制服务

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

产品:

小鼠及猕猴胚胎MECP2基因T158M单碱基突变体系

小鼠硒蛋白基因shRNA敲减慢病毒重组载体

小鼠硒蛋白基因敲减shrna慢病毒

修复细胞基因中的突变

亚克隆野生型与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶(PTEN)基因

亚克隆载体构建

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亚克隆重组质粒的构建

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移码敲除、片段敲除、多基因敲除

用途:科研

状态:固体/粉末/溶液

保存:冷藏

厂家:西安齐岳生物


注意事项:

本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。



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