构建表达载体(过表达,敲除或者敲低)，定制服务

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

过表达载体构建

首先，获取目标基因。可以从基因文库中筛选，或者通过 PCR 扩增从含有目标基因的细胞或组织的基因组 DNA 或 cDNA 中获得。在 PCR 扩增时，要根据目标基因的已知序列设计特异性引物，使用高保真 DNA 聚合酶，确保扩增产物的准确性。然后选择合适的表达载体，载体应具备强启动子（如 CMV 启动子），能在目标细胞中驱动基因的高效表达，同时有合适的多克隆位点（MCS）和选择标记（如氨苄青霉素抗性基因）。将目标基因插入到载体的 MCS 中，通过酶切和连接操作完成。酶切时根据基因和 MCS 的酶切位点选择合适的限制酶，如基因两端有 EcoRI 和 HindIII 位点，且载体 MCS 也有这两个位点，就使用这两种酶对基因和载体进行双酶切，然后用 T4 DNA 连接酶连接，形成过表达载体。

敲除载体构建

对于基因敲除载体，要设计针对目标基因关键区域的同源臂。通过生物信息学分析目标基因序列，确定敲除的靶点区域，然后合成与靶点两侧序列同源的 DNA 片段作为同源臂。载体一般选择含有合适筛选标记（如 neo 基因用于阳性筛选，tk 基因用于阴性筛选）和特定重组酶识别位点（如 Cre - loxP 系统相关位点）的载体。将同源臂插入到载体相应位置，构建成敲除载体。在细胞内，通过同源重组机制，利用同源臂与基因组中目标基因的同源序列进行交换，实现基因敲除。

敲低载体构建

敲低载体构建常采用 RNAi 技术。设计针对目标基因的 shRNA（短发夹 RNA）序列，选择在目标基因 mRNA 的编码区或 3'UTR 部分的特异性序列，长度约 19 - 29bp。合成两条互补的寡核苷酸链，退火形成双链 shRNA。选择含有 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子（如 U6 启动子）的载体，其 MCS 与 shRNA 两端酶切位点匹配。对载体进行酶切后与 shRNA 连接，形成敲低载体。在细胞中，shRNA 被转录后通过 RNA 干扰机制抑制目标基因的表达。

产品：

质粒基因递送的脂质纳米颗粒（LNP）

质粒载体-各类质粒载体构建

质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的质粒构建

肿瘤细胞和永生化细胞系敲除

重链和轻链共表达载体

重组Rab8截短体蛋白

重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4

重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白

重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)vtrna21

重组质粒的构建

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。