RNAi基因敲减细胞系构建服务，定制服务

RNAi 基因敲减细胞系构建服务是获得特定基因敲减细胞系的途径，以下是对该服务内容的详细描述。

目标基因分析与设计

首先，专业团队会对客户指定的目标基因进行深入分析。通过检索权威的基因数据库，获取目标基因的详细信息，包括其 mRNA 序列、基因结构、功能域以及在不同物种中的同源性情况等。基于这些信息，利用**的生物信息学工具设计针对目标基因的特异性 RNAi 序列。这些序列通常是长度在 19 - 29bp 的 siRNA（小干扰 RNA）或 shRNA（短发夹 RNA）序列，选择在目标基因 mRNA 的关键区域，如编码区或 3'UTR 部分，同时要确保设计的序列与其他非目标基因的同源性尽可能低，以减少脱靶效应。

载体构建

根据设计好的 RNAi 序列构建合适的表达载体。如果是 siRNA，可将其化学合成后直接转染细胞，也可以将其构建到质粒载体或病毒载体中。对于 shRNA，一般选择含有 RNA 聚合酶 Ⅲ 启动子（如 U6 启动子）的质粒载体或慢病毒载体。质粒载体具有操作简单、成本低等优点，而*载体则更适合用于难转染的细胞类型。在载体构建过程中，将合成的 RNAi 序列插入到载体的多克隆位点（MCS）中，这涉及到酶切和连接等精细的分子生物学操作。对载体和 RNAi 序列进行酶切时，要根据它们的酶切位点选择合适的限制酶，确保酶切完全，然后利用 DNA 连接酶将 RNAi 序列与酶切后的载体连接，形成重组载体。

细胞转染或感染

针对客户提供的细胞类型，选择**的转染或感染方法。如果是容易转染的细胞，如某些常见的肿瘤细胞系，可采用脂质体转染或电穿孔转染等方法。对于脂质体转染，会优化转染试剂与载体 DNA 的比例、细胞密度等参数，以提高转染效率。如果是难转染的细胞或需要长期稳定表达 RNAi 的情况，

筛选与鉴定

转染或感染后的细胞需要进行筛选以获得稳定的基因敲减细胞系。如果使用的是含有抗生素抗性基因的载体，在含有相应抗生素的培养基中培养细胞，只有成功整合了载体的细胞才能存活。经过一段时间的筛选，得到稳定表达 RNAi 的细胞群体。随后，对构建的细胞系进行全面鉴定。通过实时定量 PCR 检测目标基因 mRNA 的水平，观察其敲减程度；通过 Western blotting 检测目标基因编码蛋白的表达情况，进一步确认基因敲减效果。

齐岳生物生物提供的基因敲入细胞定制服务，包括荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、基因敲入等。通过核转染法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体（含 Cas9）与携带目的片段的 Donor 共转入细胞中，在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后，细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复（HDR）实现目的片段的定点敲入。客户可以根据自己的需求选择不同的服务类型。

产品：

FGA基因座单碱基突变

GM-CSF融合表达质粒

gRNA和Cas9共表达载体

gRNA和Cas9共表达载体  质粒载体

gRNA和Cas9共表达载体 AAV病毒载体（表达单SagRNA）

gRNA和Cas9共表达载体 PiggyBac转座载体

gRNA和Cas9共表达载体 慢病毒载体

gRNA和Cas9共表达载体 腺病毒载体

gRNA载体（单gRNA）构建

gRNA载体（双gRNA）构建

H19过表达质粒(pcDNA3.1-H19)

HBsAg融合表达质粒

HCT116细胞CTNNB1基因定点突变

HCT116细胞敲除NLRP6基因

HCT116细胞系敲除TP53基因

HeLa细胞系敲除NSUN2基因

HeLa细胞系敲除STING1基因

Hep G2细胞敲除PPP1R12B/KCNJ12/FGA基因

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。