质粒载体的构建,结构与功能介绍
质粒构建,我们首先需要获取我们需要构建在原生质粒载体上的目的片段,如过表达载体一般会构建目的基因的cds区,双荧光素酶报告基因载体一般是构建包含结合位点的目的片段,其次我们可以根据选定的目的片段通过Snapgene软件进行引物设计。获取目的的片段后,我们需要对获取的目的片段和选取的质粒载体进行双酶切暴露出粘性末端;然后用T4连接酶进行酶连。连接产物通过感受态细胞(DH5α)转化,最后进一步对单克隆菌落进行鉴定。
载体: 常见的包括质粒载体/噬菌体载体/病毒载体,我们接下来说的是质粒载体;
质粒: 一个能自我复制并表达蛋白的环状双链DNA;
fiori质粒复制起始位点: 和DNA复制一样,质粒能在真核or原核细胞中自我复制;
enhancer增强子: 增强转录作用;
Promoter启动子: 是RNA聚合酶识别并结合,使其开始转录的一段DNA启动子后从“ATG”开始到终止子结束,就是质粒表达蛋白的部分;
AmpR、Kana…抗性基因: 有哪种抗性,质粒就能在含相应抗生素的培养基中存活;
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。如有侵权,可联系我们删除