质粒构建（同源重组法）    

①载体线性化:这一步可以通过酶切或者反向PCR来实现，从而得到线性化的载体。

②插入片段获得:需要将线性化载体末端的15-20bp序列作为同源序列进行标记，一般使用红色和蓝色来进行区分。这些同源序列会被添加到基因特异性正/反向扩增引物序列的5'端。通过引物对扩增，就可以得到带有同源序列的插入片段。

③重组反应:将线性化载体和插入片段按照一定的比例混合，然后在Exnase II的催化下，在37℃下反应30分钟来完成重组反应。这个过程实现了两条线性DNA在体外的重组。

④转化感受态细胞:将重组产物直接进行转化，这样在平板上就会形成数百个单克隆，为后续的阳性筛选提供了物质基础。

⑤流程图

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

定制服务：

敲除特定基因同时敲入外来基因片段

iPS、H1、H9等细胞的基因敲除/点突变/敲入

单gRNA载体应用于移码或片段敲除

双gRNA载体应用于大片段基因敲除

全基因敲除 定制服务

条件性基因敲除 定制服务

基因敲进 定制服务

诱导性基因敲除 定制服务

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除