质粒构建的原理与类型

由于实验室质粒的人造特性，它们也被称为“vectors”（载体）或“constructs”。为了将基因插入到载体中，科学家可以利用许多可选择的克隆方法（酶切连接法、Gateway、Golden Gate，Gibson等等）。克隆方法的选择取决于所用的质粒骨架，一旦克隆步骤完成，包含新插入基因的载体将被转化到细菌细胞中并且将转化菌液涂在含有抗生素的板子上进行选择。       外源 DNA 经 PCR 扩增后，用限制性内切酶分别切割载体和外源 DNA 片段，DNA 连接酶将二者进行连接，然后转入宿主细菌，通过筛选鉴定获得重组克隆。经过一系列的操作，这个我们自己构建的质粒就完成了呈递目标片段的工作。下图是一个构建的原理图，更加方便大家理解。

比较常用的构建克隆方法大概有以下几种：

1  传统的质粒重组技术（酶切连接）     

 传统意义上，质粒重组是基于碱基互补配对的原理，一般做法为：通过引物在目的片段两端引入酶切位点；

2）用相同的限制性内切酶分别对目的片段和载体进行酶切处理；

3）目的片段和载体的酶切产物在体外连接；

4）连接产物转化大肠杆菌；

5）筛选重组子，这一块在后续的科创百科中会详细介绍。

定制服务：

诱导目的基因定点突变

基因的体外定点突变

寡核苷酸诱导的定点突变

诱导STGC3基因定点突变

利用CRISPR/Cas9系统对基因定点突变

蛋白基因定点突变

甲酸脱氢酶基因的定点突变

谷氨酰胺转胺酶基因的定点突变

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除