绿色荧光蛋白GFP基因定点突变的构建

蓝色荧光蛋白(BFP)，一种绿色荧光蛋白的突变体，它在紫外线下发出明亮的蓝色。在上世纪60年代初，Shimomura和普林斯顿大学的约翰逊研究了水母的生物荧光来源。他们发现的其中一种化合物GFP是从生物发光水母Aequoria Victoria 中分离出来。

GFP可以在没有任何额外生物体酶或辅酶因子的情况下表达。因此，如果GFP的编码序列被合并到一个质粒中，它就可以在不同种类的细胞中表达GFP。这就导致了GFP作为监视器用于基因表达和蛋白质的定位。GFP是一种含有238种氨基酸的蛋白质，构成了一种蛋白质圆柱状结构称为‘ß-can ‘（图3），整体结构显示在左边下面的图中，蛋白质链形成柱状体(蓝色)和一条链的一部分穿过罐子中间(绿色)。

光吸收和发射部分的分子，被称为发色团或荧光团，位于这条线的中央白色部分，这种结构形成了一个重要的功能受到来自“ß-can”的保护避免荧光团受到水分子的碰撞，否则会使活性分子失去活发光淬火。右边是一幅关于荧光团的详细图像，这三种氨基酸，数量为65、66和67，都参与了荧光的生成。在野生型GFP中，这些氨基酸是丝氨酸(或苏氨酸)，酪氨酸和甘氨酸。近，为了改变蛋白质的光谱特性，已经做出了一些尝试，使它应用更广泛。通过改变荧光团的氨基酸，实现荧光颜色的改变。其他分子氨基酸的改变也会改变其特性，包括它的溶解度和吸收光谱。在这个实验，你可以对GFP编码序列进行特殊的改变，比如通过突变 体蛋白改变发射荧光的颜色。我们使用pGFPuv质粒含有GFP荧光基因和(Ampr)抗性表达基因。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

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