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寡核苷酸诱导的定点突变，基因定点突变的方法

发布时间：2024-12-12 作者：axc 分享到：

寡核苷酸诱导的定点突变，基因定点突变的方法

1982年Zoller和Smith发表寡核苷酸介导的定点突变方法，该方法以M13噬菌体的DNA为载体，M13噬菌体重要的特点是含有一种单链环形DNA，即正链DNA，当其感染大肠杆菌后，借助宿主的酶系统先把正链DNA转化成双链，然后进行DNA复制扩增。在操作时，首先利用转基因技术，将待诱变的目的基因插入到M13噬菌体的正链DNA上，制备含有目的基因的单链DNA，再使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，启动单链DNA分子进行复制。这段寡核苷酸引物便成为新合成的DNA子链的一个组成部分，将其转入细胞后，经过不断复制，可获得突变的DNA分子，再经表达即可获得改造后的蛋白质。为了使目的基因的特定位点发生突变，所设计的寡核苷酸引物除所需的突变碱基外，其余的则与目的基因完全互补。此种方法保真度较高，但其缺点在于操作复杂，周期长，而且在克隆突变基因时会受到限制酶酶切位点的限制。

寡核苷酸诱导的定点突变，基因定点突变的方法

引物诱变的基本操作步骤：

1.获得单链目的基因

2.人工合成带突变序列的引物

3.制备异源双链DNA

4.转染宿主细胞

5.筛选重组体

6.突变基因的鉴定和回收

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除

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