CRISPR-Cas9技术-基因编辑
CRISPR-Cas系统是目前应用广泛的基因组编辑技术,由具有核酸内切酶功能的Cas蛋白和一条人为重组的一段目的基因的单链向导RNA(sgRNA)组成,sgRNA可以指导Cas蛋白对靶基因进行敲除、插入和突变修饰。
CRISPR-Cas系统包含CRISPR基因座和CRISPR关联基因Cas基因两部分
CRISPR基因座:主要由前导区(leader)、重复序列区(repeat)和间隔区(spacer)构成。 Cas基因:位于CRISPR基因附近或分散于基因组其他地方,编码的蛋白包括Cas1-Cas10。
CRISPR-Cas系统可分为Class I和Class II两大类
Class I:它们利用多种Cas蛋白形成影响复合物切割外源核酸的效应因子,包括Ⅰ-E型和Ⅲ型。 Class II:它们利用单个Cas蛋白进行靶向和核酸酶活性,包括Ⅱ型、V型和ⅤI型,其中II型使用Cas9蛋白,也是常用的类型。 II型CRISPR-Cas9系统含有高GC原间隔相邻基序(PAM),主要由Cas9、tracrRNA(反式激活crRNA)和crRNA(crRNA的前体)组成。 成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 系统是一种简单快速有效的方法,可直接在细胞中对基因序列进行更改。CRISPR-Cas9系统源自简单细菌免疫系统的组分,能够在多种细胞中进行靶向基因切割和基因编辑。
定制服务:
高通量DNA突变库构建服务
哺乳动物表达载体构建
病毒载体构建(慢病毒、腺病毒、AAV)
报告基因载体构建
基因突变载体构建服务
miRNA、lncRNA表达载体构建
Crispr/Cas9 基因编辑慢病毒包装
腺病毒包装技术服务
细胞实验技术服务
shRNA真核表达载体构建
gRNA载体(单gRNA)构建
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
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