CRISPR-Cas9切割DNA后启动DNA损伤修复机制,CRISPR/Cas9的基因编辑原理
CRISPR/Cas9的编辑原理
CRISPR/Cas9系统由Cas9核酸内切酶与gRNA构成,转录的gRNA折叠成特定的三维结构后与Cas9蛋白形成复合体,指导Cas9核酸内切酶识别特定靶标位点,在PAM序列上游处切割DNA造成双链DNA断裂,并启动DNA损伤修复机制。
CRISPR-Cas9切割DNA后启动DNA损伤修复机制
(1)不存在修复模板的情况下,非同源末端连接(NHEJ) 过程会导致 gRNA 定义的断裂周围有不同插入或缺失(插入缺失)的异质细胞群。可利用该过程在特定序列周围生成有随机缺失的细胞系,从而获得功能性敲除。 (2)存在修复模板的情况下,则可以通过无差错的同源定向修复 (HDR) 机制,在基因组内的特定位点引入用户定义的序列变化。该过程可用于过表达新基因,建立疾病相关细胞模型或用可报告的基团标记内源性基因。
定制服务:
点突变细胞稳转株构建
基因敲除细胞稳转株构建(移码突变)
基因敲除细胞稳转株构建(缺失突变)
基因敲低细胞稳转株构建
基因敲入细胞稳转株
Tet诱导基因表达细胞稳转株构建
质粒基因递送的脂质纳米颗粒(LNP)
shRNA基因敲低稳转株构建
文库质粒克隆(包括oligo合成和NGS验证)
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。如有侵权,可联系我们删除