慢病毒载体介导过表达和敲低细胞株的建立

利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-155的AB 8/13细胞株（AB 8/13-LV-has-miR-155）和稳定敲低miR-155的AB 8/13细胞株（AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton），为研究miR-155在足细胞焦亡和肾脏疾病中的作用奠定基础。方法　体外培养AB 8/13细胞，使用不同浓度嘌呤霉素刺激AB 8/13细胞48 h，在光学显微镜下观察AB 8/13细胞的死亡情况；使用LV-has-miR-155阴性对照病毒、LV-has-miR-155-5p inhibiton阴性对照病毒分别感染AB 8/13细胞，在荧光显微镜下观察AB 8/13细胞的状态和感染效率；在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后，通过实时荧光定量PCR法检测稳定细胞株的miR-155表达量。结果　在3.5 μg/mL及以上浓度的嘌呤霉素作用于AB 8/13细胞48 h后，所有细胞全部死亡。LV-has-miR-155慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的佳条件为在含HiTransG P的完全培养基中进行感染，MOI为10；LV-has-miR-155-5p inhibiton慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的佳条件为在含HiTransG A的完全培养基中进行感染，MOI为100。qRT-PCR结果显示AB 8/13-LV-has-miR-155细胞株的miR-155表达量明显升高，AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton细胞株的miR-155表达量降低。结论　成功构建AB 8/13-LV-has-miR-155稳定细胞株和AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton稳定细胞株，为进一步探究miR-155在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础。

定制服务：

基因敲入细胞定制服务

安全位点基因敲入

哺乳动物细胞基因敲入

ESC或iPSC干细胞基因敲入

荧光/蛋白标签定点敲入

CRISPR/CAS9介导基因敲入

基因敲入单克细胞一株

Tag标签敲入（无痕敲入）

报告基因敲入

基于puro标记筛选的safe harbor位点基因敲入（标记筛选）

基因敲入小鼠

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。