CRISPRa基因过表达技术，CRISPR/Cas9系统

传统的基因过表达技术是将基因的开放阅读框（ORF）构建到启动子下游，通过载体转染到细胞中以提升基因表达量；然后观察该细胞的变化，从而了解该基因的功能。常见载体有转座子载体，慢病毒载体，腺病毒载体等多种类型。

CRISPR/Cas9系统可以用来编辑基因组。规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的复合物，可以在gRNA的指引下，靶向基因组的特定区域并切割DNA，产生DNA双链断裂。

对Cas9蛋白进行改造，可以激活或抑制基因表达。调节基因表达时需要催化功能失活的“dead”Cas9（dCas9），即Cas9发生两个氨基酸突变，D10A，H840A。dCas9蛋白不能进行DNA双链的切割，但仍旧可以在gRNA的指导下与特定靶向的DNA紧紧结合。CRISPRa （CRISPR activation）技术，是让dCas9与不同的转录激活子结合，从而发挥上调靶基因表达水平的作用。直接将dCas9与单个转录激活因子（如VP64或VP16）融合表达，对靶基因的调控能力较弱。为了提高表达水平，可将多个转录激活因子同时融合于dCas9，如三元转录激活因子VPR（VP64-p65-Rta）融合到dCas9的C端，产生融合蛋白dCas9-VP64-p65-Rta（dCas9-VPR）。此外，还可以在dCas9上融合多个抗原表位短肽GCN4，而将转录激活因子VP64融合于其抗体scFv。在该系统中，GCN4-dCas9能高效地招募多拷贝的scFv-VP64，提高基因表达水平。

CRISPRa技术优势

CRISPRa通过激活内源性启动子高效转录，从而促进基因表达，不需要额外构建外源性表达元件，不受基因转录本大小的限制。dCas9介导的基因调控是可逆的，不会永久性地修饰基因组DNA。而且，可以设计多条gRNAs，同时对多个靶基因进行调控。此外，dCas9与荧光蛋白融合表达，还可以对靶基因定位进行示踪。    

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

α-甘露糖苷酶SSc4基因过表达质粒

GM-CSF融合表达质粒

HBsAg融合表达质粒

融合表达质粒pcDNA3.1 S GM CSF

pcDNA3.1 GM CSFS融合表达质粒

再生蛋白Iα(REGENERATIONGENEIα,REGIα)的CDNA过表达质粒表达载体

再生蛋白 Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒

重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4

真核表达质粒载体pcDNA3.1

pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒

MCF-7细胞过表达线粒体融合素基因-2(Mfn2)

IGF-1过表达质粒

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

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