shRNA载体构建原则，短发卡RNA（short hairpin RNA）

shRNA具有较强的基因沉默能力，在体内转录后经过酶切形成siRNA分子，通过与RNA干扰复合体（RISC）结合，降解特定的mRNA分子，进而对特定基因表达进行调控。shRNA技术已应用于基因功能研究和基因等领域。

shRNA可以克隆到表达载体并表达siRNA 分子，我们可以根据目的基因设计shRNA序列并将其克隆到表达载体中。

（1）克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间被一茎环（loop）序列分隔开，形成一个发夹结构，由RNA聚合酶III转录。

（2）两条DNA链互补且两端带有限制性酶切位点，以便之后载体构建。

（3）在启动子下游的切割位点下方紧连一个C，使插入片段和起始子之间有一定的空间，以保证基因转录的发生。

（4）shRNA的正义链5’端必须有一个G，其目的是为了保证RNA聚合酶可以准确识别并转录。

（5）插入的shRNA的茎环应当靠近双链的中心位置。

（6）为了保证RNA聚合酶Ⅲ可以终止转录，5-6个dT必须放置在shRNA插入片段的末端（Pol III转录终止是由DNA非模版链上连续的4～7个脱氧胸腺嘧啶核苷介导）。

（7）在正义链和反义链序列上不能有连续3个或更多的T。这可能导致shRNA的转录提前终止。

shRNA的优势

1.靶向性强

理论上，shRNA能够对目标基因进行特异性的抑制，而不影响其他基因的表达。这种靶向性强的特点使得shRNA在基础研究和临床治疗中有着的应用前景。

2.适用范围广

shRNA可以用于多种类型的细胞和生物体系中，并且能够针对多种不同的基因进行沉默。

3.操作简单

与其他基因敲除技术相比，shRNA的设计、合成和操作相对简单。通常只需要将shRNA序列克隆到质粒或病毒载体中，然后导入到细胞内即可实现基因沉默效应。

4.抑制效果持久

shRNA可以在细胞内诱导长期的基因沉默效应，其抑制效果可以持续几天甚至数周。

5.技术成熟

自从RNA干扰技术被发现以来，shRNA设计和合成技术已经不断完善，且有多种商业化产品可供选择。这种技术成熟的特点保证了shRNA在实际应用中的稳定性和可靠性。

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除

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