RNA干扰稳定表达细胞株构建原理

RNA干扰(RNA interference, RNAi)稳定表达细胞株的构建原理：病毒包装的shRNA整合到宿主基因组中，RNA聚合酶Ⅲ通过识别特定的启动子（U6, H1）启动转录，在TTTT序列处RNA聚合酶Ⅲ掉落，shRNA停止转录后自动折叠并被分泌到胞质内，Dicer可以识别细胞质内的shRNA并切割颈环（loop）使其成为siRNA，后者与RNA干扰复合体（RNA induced silencing complex，RISC）结合后降解特定的mRNA分子，进而对特定基因的表达进行敲减。因为有引导RNA的作用，少量的引导RNA就可以引发大量特定的mRNA被切割，敲减效率很高

病毒包装的载体包括稳定表达型载体和诱导表达型载体。两者的酶切位点是一样的，为Age1和EcoR1

shRNA：具有发夹结构+茎区成对的反义和正义链（各21bp）+未配对的成环核苷酸

shRNA干扰载体并构建若通过直接转染siRNA进行基因沉默，直接进行化学合成即可。若通过质粒或病毒如慢病毒（LV）、腺相关病毒（AAV）长期或体内递送siRNA，需提前构建合适的核心质粒，并生产相应的质粒或病毒颗粒使其在细胞或体内进行表达。选择合适的表达载体至关重要，以AAV为例：

1.基于U6/H1启动子的 shRNA 干扰载体shRNA是一类小/短发夹的双链RNA，由于构建序列较短，需使用特定的pol III型启动子U6或者H1实现体内的表达。U6/H1启动子具有表达能力强，表达范围广等优点，常用于实现全脑区或组织内的基因干扰。以AAV病毒核心质粒为例，载体结构如下： 

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

定制服务：

截断突变载体系统

基因截短的重组表达质粒pET28a—NS1-RBD和pET28a—NS1-ED

Nrd1点突变体和截短体

构建N端，C端，N+C端单结构域缺失的截短体质粒

构建CSD（氨基酸39-112）单结构域缺失的截短体质粒

构建ZFD（氨基酸137-176）单结构域缺失的截短体质粒

eGFP-LIN28A敲入的小鼠胚胎干细胞E14细胞系

eGFP-LIN28A过表达小鼠胚胎干细胞E14细胞系

全长人环核苷酸磷酸二酯酶4B2截短突变体(152aa-528aa)

功能域截短体的原核表达质粒

SCIRR 10蛋白截短体真核表达载体

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除