基因敲入技术(KI)-同源重组/病毒载体/CRISPR/Cas9系统

基因敲入技术(KI)基因敲入是指将一个新的基因或DNA序列插入到基因组中的一个特定位置。这一技术可以通过同源重组、病毒载体或CRISPR/Cas9系统来实现。

同源重组：需要将一个包含所需基因序列的修饰DNA片段引入到目标位点，通过与靶DNA两侧的同源序列进行重组，将新基因插入到基因组中。

病毒载体：如逆转录病毒或腺相关病毒（AAVs），可以用来将新基因传递到基因组中，实现基因敲入。

CRISPR/Cas9系统：通过使用供体DNA模板以及sgRNA和Cas9酶，在基因组中精确引入点突变或插入目的基因。当Cas9内切酶切割双链DNA时，提供一个与靶基因高度同源的DNA修复模板，细胞启动同源重组修复（HDR）路径，将目的序列精准插入特定的基因组位点。

定制服务：

shRNA真核表达载体构建

gRNA载体（单gRNA）构建

gRNA载体（双gRNA）构建

基因过表达细胞稳转株构建

基因敲入细胞稳转株构建（插入片段<3 kb）

点突变细胞稳转株构建

基因敲除细胞稳转株构建（移码突变）

基因敲除细胞稳转株构建（缺失突变）

基因敲低细胞稳转株构建

基因敲入细胞稳转株

Tet诱导基因表达细胞稳转株构建

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

基于CRISPR/Cas9基因敲入(KI)的步骤：

分析敲入基因，确定靶位点进行sgRNA的设计

构建敲入载体:Cas9-sgRNA表达质粒、donor DNA

构建基因敲入细胞株：依据所要编辑的细胞选择Cas9、sgRNA和donor不同导入方式（脂质体、电转或病毒包装）

将抗生素素筛选后分离的细胞克隆进行测序验证；96孔板进一步筛选单克隆并测序，选择敲入纯合细胞株。

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除