CRISPR/Cas9细胞基因敲除技术

CRISPR/Cas9是一种分子生物学技术，通过这种技术科研人员可以对细胞和生物体内的基因进行编辑。所谓的基因编辑就是通过某种生物手段和技术，对生物体内的遗传物质进行修改。    

CRISPR/Cas9技术只包含两种重要的成分，一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白，而另一种则是具有导向功能的sgRNA（single guide RNA）。当细胞内同时表达sgRNA和Cas9蛋白时，Cas9蛋白通过与sgRNA结合，靶向到目的DNA序列上发挥DNA双链切割的功能。DNA序列被切割产生断裂后，引发细胞内部的DNA修复机制（DNA repair）。真核细胞同时存在着同源重组修复和非同源重组修复。在同源重组修复下，断裂的染色体以另一条完整的姐妹染色单体为模板进行DNA修复，而在非同源重组修复下，断裂出的DNA随机修复，引入新的碱基，使基因产生移码突变。

CRISPR/Cas9的基因敲除

在实际实验过程中，我们只需要将Cas9蛋白和设计好的gRNA同时“运送”进细胞中即可，接下来的就交给细胞自己去操作了。

对于转导gRNA和Cas蛋白的常见方法主要有四种：(1）RNP法：直接将大量的gRNA和Cas9蛋白，通过电转的方式转染目的细胞

(2）病毒法：构建慢病毒（LV）敲除质粒，经病毒包装和纯化后转染细胞，将sgRNA和Cas9蛋白元件整合到细胞基因组中，从而使细胞源源不断地生产sgRNA和Cas9蛋白。

(3）常规质粒法：构建常规敲除质粒，通过电转将其导入细胞，短时间内表达gRNA和Cas9蛋白。

(4）VIRUS-Free™转座子法：将携带有转座子和转座酶的质粒共转染细胞，转座酶促进转座，将高拷贝的Cas9蛋白和gRNA表达元件随机整合到基因组，实现gRNA和Cas9蛋白的持续表达。

定制服务：

基因敲入细胞定制服务

安全位点基因敲入

哺乳动物细胞基因敲入

ESC或iPSC干细胞基因敲入

荧光/蛋白标签定点敲入

CRISPR/CAS9介导基因敲入

基因敲入单克细胞一株

Tag标签敲入（无痕敲入）

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除