基因敲除小鼠的类型，完全基因敲除小鼠/条件性基因敲除小鼠实验

建立常规基因敲除（knockout，简称KO）小鼠模型，使您感兴趣的靶基因功能在小鼠所有细胞以及整个生命过程中永久缺失。通过CRISPR基因编辑技术，构建一个常规基因敲除小鼠模型一般需要4-6个月。

根据基因序列设计合成sgRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵，Cas9核酸酶、 sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA ，通过非同源性末端接合(NHEJ)修复途径造成靶基因的移码突变或片段敲除，从而实现基因敲除。NHEJ修复是随机的，可能在同一小鼠体内不同细胞造成的修复结果不同，F0小鼠需要繁殖一代，获得稳定遗传的敲除杂合子小鼠。

通过ES细胞打靶技术，构建一个常规基因敲除小鼠模型一般需要7-12个月。

构建以筛选基因新霉素（Neo）取代靶基因的一个或多个外显子的重组载体，转入ES细胞，获得正确发生同源重组的ES克隆。ES细胞进行囊胚注射，获得部分ES来源的嵌合鼠，嵌合鼠与野生型小鼠交配，获得来源于重组ES细胞的杂合子小鼠。杂合子小鼠一条染色体上的靶基因指定外显子被Neo基因所取代，杂合子交配获得靶基因失活的纯合子小鼠。

基因敲除小鼠的类型

（1）完全基因敲除小鼠（Knockout，KO）：指在小鼠所有组织细胞中，将靶基因的某些重要外显子或功能结构域、甚至所有的外显子敲除掉，导致靶基因的表达缺失。可用于研究目的基因对全身生理或病理的功能。优点是：小鼠模型构建周期短，交配流程简单。缺点是：大约有1/3的基因纯合敲除后会导致小鼠胚胎期死亡或出生期死亡，引发其它基因的代偿，导致基因敲除后没有明显表型改变。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除