原理：

当Cas9内切酶切割双链DNA时，细胞自身启动更具优势的NHEJ修复途径，导致切割位点产生移码突变或片段缺失，从而造成基因沉默，功能丧失，实现基因敲除。

步骤：

（1）分析敲除基因，确定敲除靶标位点；

（2）设计并合成识别靶标位点的sgRNA；

（3）构建基因敲除载体；

（4）构建基因敲除细胞株:依据所要编辑的细胞选择Cas9和sgRNA不同导入方式（脂质体、电转或病毒包装）；

（5）将抗生素素筛选后分离的细胞克隆进行测序验证；

（6）96孔板进一步筛选单克隆并测序，选择敲除纯合细胞株。

应用：

基因敲除实验被广泛用于研究基因功能和了解特定基因在各种生物过程中的作用。通过观察基因失活的影响，研究人员可以推断出该基因的正常功能，确定其对疾病的贡献，并发现潜在的治疗靶点。具体如下：

（1）CRISPR/Cas9基因敲除细胞系的建立；

（2）CRISPR/Cas9基因敲除动物疾病模型的建立。

定制服务

基因敲入细胞

CRISPR Cas9基因敲入

提供多种类型的基因敲入服务

荧光蛋白定点敲入

蛋白标签定点敲入

HiBiT定点敲入

基因敲入细胞定制服务

安全位点基因敲入

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除