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CRISPR-Cas9基因敲入系统技术原理

发布时间：2024-12-17 作者：axc 分享到：

CRISPR-Cas9基因敲入系统技术原理

CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA，且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下，生物体内启动HDR修复路径，将一段外源DNA定点插入基因内部。

同源性定向修复（HDR）途径，对比NHEJ修复途径，同源性定向修复（HDR）途径是更为精确的修复机制。这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入。在该修复路径中，需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板、特异的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中。

在高度同源性DNA模板存在的情况下， HDR机制可以通过同源重组将一段DNA插入编辑位点（图4）。这种修复方式可以将一段DNA序列精准地插入特定的基因组位点。

基因敲入服务流程

· 细胞检测

微生物、增殖能力、克隆形成能力、gRNA位点

· 敲除载体构建和Donor载体构建

非病毒体系、gRNA载体、Donor载体

· 细胞电转，基因突变Cell pool构建

电转参数优化、Cell pool编辑效率检测（部分项目）

· ClonePlus 细胞单克隆筛选

ClonePlus单克隆技术、高通量阳性克隆筛选

· ClonePlus基因定点敲入

单克隆（12-18周）

稳定敲入

长期研究（传代-扩增）

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除