Collagen-FITC，胶原蛋白荧光标记，绿色荧光染料胶原蛋白的实验步骤

产品名称：Collagen-FITC，胶原蛋白荧光标记

纯度：95%+

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

实验材料准备

胶原蛋白：选择合适来源和纯度的胶原蛋白，如牛跟腱胶原蛋白，将其溶解在合适的缓冲液中，例如 0.05M 醋酸溶液，配制成一定浓度（如 1mg/mL）的胶原蛋白溶液。

FITC（异硫氰酸荧光素）：FITC 为黄色结晶粉末，用无水乙醇溶解配制成 10mg/mL 的储备液，避光保存。

缓冲液：准备 0.1M 碳酸盐缓冲液（pH 9.0 - 9.5），用于调节反应体系的酸碱度。

标记反应

在通风橱中，将适量的 FITC 储备液缓慢滴加到胶原蛋白溶液中，边滴加边搅拌，FITC 与胶原蛋白的摩尔比一般控制在 10:1 - 20:1。

滴加完成后，继续搅拌反应 2 - 4 小时，反应温度控制在室温（20 - 25℃），此过程中 FITC 的异硫氰酸酯基团（-N=C=S）与胶原蛋白分子上的氨基（-NH₂）发生亲核加成反应，形成稳定的硫脲键，从而将 FITC 标记到胶原蛋白上。

分离纯化

采用透析法去除未反应的 FITC。将反应后的溶液装入截留分子量合适（如 3000 - 5000Da）的透析袋中，放入大量的 PBS 缓冲液（pH 7.4）中透析，每隔 2 - 3 小时更换一次透析液，透析过夜（约 12 - 16 小时）。

也可使用凝胶过滤色谱法，如选用 Sephadex G - 25 凝胶柱，用 PBS 缓冲液平衡柱子后，将反应液上样，再用 PBS 缓冲液洗脱，收集含有 Collagen - FITC 的洗脱液。

鉴定与保存

采用荧光分光光度计检测 Collagen - FITC 的荧光强度和激发、发射光谱，确定标记是否成功以及标记率。

将纯化后的 Collagen - FITC 溶液分装，避光保存于 4℃冰箱，避免反复冻融。

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用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.03.03