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His Tag,组氨酸标签
发布时间:2025-03-05     作者:wyh   分享到:

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产品名称:His Tag,组氨酸标签

His Tag,即组氨酸标签,是一种在分子生物学和生物工程领域广泛应用的蛋白质纯化标签。

一、组成与结构

His Tag通常由六个或更多连续的组氨酸残基组成,这些组氨酸残基可以插入到目的蛋白的C末端或N末端。常见的His Tag形式有6xHis、8xHis和10xHis等,其中6xHis是最常用的形式。

二、特性与应用

分子量小:His Tag的分子量很小,只有约0.84KD,通常不会影响重组蛋白质的结构和功能。这使得His Tag成为重组蛋白生产和分离中的流行标签。

易于纯化:His Tag具有与金属离子(如镍离子)高亲和力的特性,因此可以通过金属亲和层析技术(如Ni-NTA层析)实现蛋白质的纯化。这种方法具有高效、简便、快速的优点,适用于大规模蛋白质纯化。

检测方便:由于His Tag的存在,可以使用抗His标签抗体对纯化后的蛋白质进行特异性检测。这种检测方法灵敏度高、特异性强,有助于确认纯化蛋白质的身份和纯度。

多功能性:除了纯化功能外,His Tag还可以用于蛋白质的定位、功能研究以及与其他分子的相互作用研究等。这使得His Tag在蛋白质组学、细胞生物学和结构生物学等领域具有广泛的应用价值。

三、纯化原理与步骤

纯化原理:His Tag与金属离子的高亲和力是实现蛋白质纯化的关键。在金属亲和层析柱中,镍离子与His Tag结合形成稳定的复合物,而其他非特异性蛋白质则无法与层析柱结合或结合力较弱。通过洗脱步骤,可以将结合在层析柱上的His-tagged蛋白质洗脱下来,从而实现蛋白质的纯化。

纯化步骤:

准备His-tagged蛋白质样品:将目的蛋白质的编码序列与His Tag的序列连接,构建His-tagged蛋白质的表达载体。通过基因工程技术将表达载体转化至大肠杆菌或其他表达系统,并利用诱导剂诱导表达His-tagged蛋白质。

层析柱平衡:使用适当的缓冲液对金属亲和层析柱进行平衡,以确保层析柱处于最佳工作状态。

上样与洗杂:将蛋白质提取物加入层析柱中,让目的蛋白质与层析柱结合。然后使用洗杂溶液洗去未结合的杂蛋白质。

洗脱与收集:使用含有咪唑等螯合剂的洗脱液将结合在层析柱上的His-tagged蛋白质洗脱下来,并收集纯化后的蛋白质样品。

产地:西安

状态:固体/粉末/溶液

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

His Tag,组氨酸标签

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