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产品名称:FITC-PEOz-MAL,荧光素异硫氰酸酯-聚(2-乙基-2-噁唑啉)-马来酰亚胺
1. 结构设计
FITC(荧光标记):
荧光素异硫氰酸酯(FITC),提供绿色荧光(λ_ex~495 nm,λ_em~525 nm),用于追踪、成像或定量分析。
PEOz(亲水间隔臂):
抗蛋白吸附的聚(2-乙基-2-噁唑啉),作为柔性链段隔离FITC与MAL,减少空间位阻和荧光淬灭。
MAL(巯基反应基团):
马来酰亚胺(MAL),通过迈克尔加成与巯基(-SH)高效反应(速率常数~10³ M⁻¹s⁻¹),用于偶联含巯基生物分子(如抗体、蛋白、肽)。
2. 合成策略
双端修饰法:
步骤1:通过阳离子开环聚合合成PEOz-NH₂(如使用氨基引发剂)。
步骤2:将FITC的异硫氰酸酯基团与部分氨基反应(pH 8-9,避光),形成FITC-PEOz-NH₂。
步骤3:剩余氨基与马来酰亚胺丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(BMPS)反应,引入MAL基团。
保护-脱保护法:
步骤1:合成PEOz-N₃(通过叠氮化钠取代PEOz-OTs)。
步骤2:通过点击化学(如CuAAC)选择性修饰一端为FITC。
步骤3:还原另一端叠氮基为氨基,再偶联MAL。
3. 关键性质
光学性能:
FITC荧光强度受PEOz链长影响(短链保留亮度,长链可能淬灭)。
反应活性:
MAL在生理条件下(pH 7.4)稳定,与巯基偶联效率高(>95%)。
抗污性:
PEOz链屏蔽FITC和MAL,减少非特异性蛋白吸附。
生物相容性:
PEOz通过FDA认证,FITC和MAL常用生物标记试剂。
4. 表征与优化方向
结构验证:
NMR:确认PEOz链长、FITC/MAL接枝率及位置。
UV-Vis:定量FITC标记密度(λ_abs~495 nm)。
HPLC:分析MAL修饰效率(通过巯基反应前后峰面积变化)。
性能评估:
荧光量子产率:比较自由FITC与FITC-PEOz-MAL的亮度。
偶联效率:通过Ellman试剂检测剩余巯基,计算MAL反应率。
血清稳定性:验证PEOz抗污性对荧光信号的维持作用。
挑战与优化:
链长调控:平衡PEOz亲水性与FITC荧光强度(推荐DP=20-50)。
正交修饰:确保FITC和MAL分别修饰在PEOz两端(需保护-脱保护策略)。
储存条件:避光低温保存,防止FITC光漂白。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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