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产品名称:CY5.5-Hydrazide ;CY5.5修饰的酰肼;CY5.5-HZ
1. 结构与设计
Cy5.5:
远红光/NIR荧光染料,典型光谱:
Ex/Em≈675/695 nm(具体依供应商调整),量子产率(Φ≈0.15-0.25)。
相比Cy5(~670 nm),Cy5.5波长更长,组织穿透更深。
Hydrazide(肼基):
-NHNH₂基团,与醛基(-CHO)或酮基(C=O)在酸性/中性条件下形成腙键(C=N-NH-),反应速率常数(k≈10² M⁻¹s⁻¹)。
典型结构:
Cy5.5通过柔性连接臂(如PEG链)与肼基相连,减少空间位阻对反应的影响。
2. 合成策略
步骤:
Cy5.5活化:将Cy5.5-NHS酯与肼(H₂NNH₂)在pH 7.5-8.5条件下反应,引入肼基。
纯化:HPLC分离未反应染料及副产物。
关键控制点:
肼需新鲜配制(易氧化,储存时添加BHT)。
避光操作(Cy5.5光敏)。
反应pH避免过高(减少肼水解)。
3. 物理化学性质
光谱特性:
消光系数(ε≈150,000-250,000 M⁻¹cm⁻¹),适合低浓度检测。
光稳定性:连续激发下荧光衰减<15%(1h内)。
反应活性:
腙键形成条件:pH 4.5-7.0(醛基反应),需优化缓冲体系。
选择性:优先与芳香醛/酮反应(如糖基氧化产物)。
稳定性:
腙键对pH敏感:酸性条件下水解(需中性储存)。
氧化敏感性:肼基需避光、低温保存。
4. 典型应用
糖基化检测:
标记氧化糖基:Cy5.5-Hydrazide与葡萄糖醛酸(HRP催化产物)反应,检测糖基化蛋白。
代谢标记:追踪细胞表面唾液酸化或O-GlcNAc修饰。
酶联反应:
HRP/ALP信号放大:酶催化产生醛基底物,与肼基偶联实现荧光信号增强。
脂质过氧化检测:标记4-HNE(羟基壬烯醛)等氧化产物。
药物递送:
pH敏感释放:腙键在溶酶体(pH 5.0-6.0)水解,实现药物可控释放。
靶向成像:标记纳米粒,通过腙键连接肿瘤相关糖基。
5. 注意事项
储存条件:
避光、-20℃保存(DMSO或干燥状态)。
添加抗氧化剂(如BHT)防止肼氧化。
反应优化:
缓冲液选择:MES(pH 5.5-6.5)或PBS(pH 7.2)。
封闭步骤:反应前用甘氨酸或BSA封闭未反应肼基。
质量控制:
HPLC验证纯度(>95%)。
腙键稳定性测试:不同pH下荧光保留率。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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