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产品名称：芘丁酸PEG活性酯， PYRENE-PEG-NHS

实验操作指南

氨基化底物制备

方法1：通过EDC/NHS活化羧基化分子（如蛋白质、多肽），再与氨甲基聚苯乙烯（AM-PS）反应，引入氨基。

方法2：直接合成含氨基的配体（如氨基化PEG、氨基化脂质）。

PYR-PEG-NHS偶联步骤

第一步：NHS与氨基反应

将PYR-PEG-NHS溶于PBS缓冲液（pH 7.4，浓度1-10 mM）。

加入氨基化底物（摩尔比1:1-1:3），室温搅拌反应1-2小时。

通过透析（MWCO 3.5k）或超滤（10k cutoff）去除未反应的PYR-PEG-NHS。

第二步：纯化与表征

通过SDS-PAGE或HPLC检测标记效率（如荧光扫描仪检测蛋白条带的荧光强度）。

通过荧光光谱仪检测产物的荧光发射峰（λ_em=378 nm）。

反应条件优化

NHS与氨基反应：避免强碱性条件（如pH>9），否则NHS酯会水解。

反应时间：延长反应时间（如过夜）可提高标记效率，但需避免过度反应导致荧光淬灭。

溶剂选择：水相反应更温和，但DMSO可提高NHS酯的溶解性（需控制体积比<10%）。

表征方法

标记效率：通过荧光光谱仪检测产物荧光强度，或通过比色法（如BCA法）测定蛋白浓度，计算标记率（荧光强度/蛋白浓度）。

荧光稳定性：通过长时间光照（365 nm）检测荧光强度变化（芘荧光半衰期>10小时）。

功能验证：通过共聚焦显微镜观察细胞摄取，或通过流式细胞术检测荧光标记效率。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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