DSPE-PEG2000-mal 形成GSH-PEG-DSPE的过程揭秘!
DSPE-PEG2000-Mal(马来酰亚胺末端的聚乙二醇修饰磷脂)与谷胱甘肽(GSH)反应生成 GSH-PEG-DSPE 的过程,是一种典型的 硫醇-马来酰亚胺点击反应,常用于构建靶向功能化脂质材料或纳米粒子。以下是详细的反应步骤与要点分享:
一、反应原理
DSPE-PEG2000-Mal 含有一个末端马来酰亚胺基团(Mal),而 GSH 分子中的 巯基(-SH) 是与马来酰亚胺高效反应的活性位点。该反应是一种Michael加成反应,具有:
高选择性(对巯基特异性强)
反应温和(常温、pH ~6.5–7.5)
产物稳定(生成稳定的硫醚键)
二、反应材料准备
组分 | 来源与形式 | 浓度建议 |
DSPE-PEG2000-Mal | 溶解于 DMSO、DMF 或含 10–20% 乙醇的水溶液 | 1–10 mg/mL |
GSH(谷胱甘肽) | 通常用还原态,溶于 PBS 或 HEPES 缓冲液 | 2–5 倍摩尔当量 |
三、推荐反应条件
反应溶剂:PBS 或 HEPES 缓冲液,pH 6.8–7.4;可加入少量 DMSO(<10%)协助溶解。
反应比例:GSH:DSPE-PEG2000-Mal = 1.5–2:1(摩尔比)
温度:室温(20–25 °C)
时间:2–4 小时,或更长时间以提高效率
避光:建议避光反应以保护 GSH 的还原态活性
四、后处理方法
去除未反应的GSH与副产物:
超滤法(如使用 3–10 kDa 截留的超滤管)
或用透析袋透析(3.5–10 kDa MWCO)
干燥保存:
冷冻干燥或浓缩后低温(-20°C)保存
可溶于PBS或乙醇/水混合溶液备用
五、验证方法
方法 | 用途 |
质谱(MALDI-TOF) | 检测产物分子量变化 |
核磁(1H NMR) | 确认马来酰亚胺消失、新键形成 |
TLC或HPLC | 追踪反应进度和纯度 |
Ellman试剂法 | 检测反应后是否有残余巯基 |
六、注意事项
GSH容易氧化形成GSSG(谷胱甘肽二聚体),应新鲜配制,或添加还原剂如TCEP。
DSPE-PEG2000-Mal 对水解敏感,建议现用现配。
控制 pH 在中性偏弱酸区间(~6.8)以防马来酰亚胺水解。
关于我们:
西安齐岳生物提供多种聚乙二醇(PEG)相关产品,其中PEG衍生物系列丰富,涵盖不同分子量与活性基团修饰类型。例如,公司可提供含羧基(-COOH)、氨基(-NH₂)、马来酰亚胺(Mal)等功能化PEG,适配药物递送载体修饰需求;针对生物偶联场景,提供荧光标记PEG(如FITC/Cy染料修饰)及靶向分子(如叶酸-PEG)以增强载体靶向性;同时供应PEG-磷脂复合物(如DSPE-PEG)用于脂质体制备,以及可生物降解的PEG嵌段共聚物(如PLGA-PEG、PCL-PEG)以实现药物缓释。所有产品均经过严格纯化(纯度≥95%),支持定制化分子量与官能团组合,并提供配套表征服务,满足科研及工业级应用需求。
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