以下是 DSPE-PEG-Mal 与多肽反应的具体步骤及注意事项，综合多篇文献优化整理：
一、材料准备
反应物与试剂
l DSPE-PEG-Mal（脂质-聚乙二醇-马来酰亚胺）
l 含半胱氨酸（Cys）的多肽（需含游离巯基 -SH）
l 还原剂（如 TCEP·HCl，用于保持巯基还原态）
l 缓冲液（推荐 pH 6.5-7.5 的 PBS 或 HEPES）
二、反应步骤
1. 多肽前处理
l 巯基激活：
l 将多肽溶于含 1-5 mM TCEP·HCl 的缓冲液中，室温孵育 30 分钟，确保半胱氨酸的巯基处于还原状态。
l 若多肽不含 Cys，需通过基因工程或化学修饰（如引入 Cys 残基）改造序列。
2. DSPE-PEG-Mal 活化
l 将 DSPE-PEG-Mal 溶解于有机溶剂（如 DMF 或 DMSO），浓度建议为 5-10 mg/mL，随后转移至缓冲液体系中（终浓度有机溶剂 <10% v/v）。
3. 偶联反应
步骤 | 参数 | 说明 |
摩尔比 | DSPE-PEG-Mal : 多肽 = 1 : 1.2-1.5 | 确保马来酰亚胺充分反应，避免过量多肽浪费 |
pH | 6.5-7.5 | 中性偏弱酸性环境可抑制 MAL 水解，同时维持巯基活性 |
温度 | 25-37°C | 室温或略高温度均可，避免高温导致 MAL 降解 |
时间 | 2-4 小时 | 反应时间过长可能导致 MAL 水解失效 |
三、产物纯化与表征
纯化流程
l 透析法：使用截留分子量 3.5-10 kDa 透析袋，在缓冲液中透析 24-48 小时，去除未反应多肽和小分子杂质。
l 凝胶过滤色谱（如 Sephadex G-25）：分离偶联产物与游离多肽。
表征方法
l MALDI-TOF 质谱：检测偶联物分子量变化，确认偶联成功。
l SDS-PAGE 电泳：通过条带迁移率评估偶联效率。
四、优化建议
偶联效率低：
l 检查多肽巯基是否充分暴露（避免分子内二硫键干扰）。
l 提高 DSPE-PEG-Mal 过量比（如 1:2）。
MAL 基团水解：
l 缩短反应时间至 2 小时内，或使用有机相反应体系（如 DMF）。
五、注意事项
要点 | 说明 |
缓冲液避氧 | 反应环境需氮气保护，防止巯基氧化 |
储存条件 | 原料及产物需 -20°C 避光保存，避免反复冻融 |
反应体系监控 | 通过 Ellman’s 试剂检测游离巯基浓度，判断反应进程 |
典型案例
靶向肽偶联：将膀胱癌靶向肽 NYZL1（含 Cys）与 DSPE-PEG-Mal 偶联，用于膀胱癌药物递送系统的构建。
双重功能化：结合 DOTA-PEG-Mal 合成策略，实现放射性标记与靶向双功能整合。
关于我们：
西安齐岳生物提供多种聚乙二醇（PEG）相关产品，其中PEG衍生物系列丰富，涵盖不同分子量与活性基团修饰类型。例如，公司可提供含羧基（-COOH）、氨基（-NH₂）、马来酰亚胺（Mal）等功能化PEG，适配药物递送载体修饰需求；针对生物偶联场景，提供荧光标记PEG（如FITC/Cy染料修饰）及靶向分子（如叶酸-PEG）以增强载体靶向性；同时供应PEG-磷脂复合物（如DSPE-PEG）用于脂质体制备，以及可生物降解的PEG嵌段共聚物（如PLGA-PEG、PCL-PEG）以实现药物缓释。所有产品均经过严格纯化（纯度≥95%），支持定制化分子量与官能团组合，并提供配套表征服务，满足科研及工业级应用需求。
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