FITC-Human IgA,异硫氰酸荧光素(FITC)标记重组人IgA的合成步骤概述
FITC通过异硫氰酸酯基团与IgA抗体的赖氨酸残基ε-氨基共价结合,实现荧光标记,用于免疫荧光检测、流式细胞术或细胞成像。
合成步骤概述:
缓冲液置换:
将重组人IgA溶于碳酸盐缓冲液(pH9.0-9.5),去除含氨基的缓冲剂(如Tris),避免竞争反应。
FITC溶解与添加:
FITC溶于DMSO制成高浓度溶液,缓慢滴入IgA溶液中,避光搅拌反应2-4小时(室温或4℃)。
反应式:FITC-N=C=S+H₂N-IgA→IgA-NH-CO-S-FITC
终止反应:
加入Tris-HCl缓冲液(pH8.0)封闭未反应的FITC。
纯化:
透析:用PBS透析去除游离FITC(分子量截止值10kDa)。
凝胶过滤层析:如SephadexG-25柱,分离标记与未标记的IgA。
质量控制:
荧光光谱:测定激发(~495nm)和发射(~520nm)强度,计算标记效率(F/P比值)。
SDS-PAGE:检测蛋白完整性,避免降解或聚集。
名称:FITC-Human IgA,异硫氰酸荧光素(FITC)标记重组人IgA
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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