FITC-D-Lys 合成步骤详解

一、反应原理

异硫氰酸荧光素（FITC）的异硫氰酸酯基（-NCS）与 D-赖氨酸的 ε-氨基（-NH₂）在碱性介质中发生亲核加成反应，形成稳定的硫脲键（-NH-CS-NH-），生成 FITC-D-Lys 荧光衍生物。

二、实验步骤

原料准备‌

FITC 溶液配制‌：将 FITC（1-5 mg/mL）溶解于无水 DMSO 中，避光保存。

D-赖氨酸溶液配制‌：将 D-赖氨酸溶解于 0.1 M 碳酸氢钠缓冲液（pH 8.5）中，确保氨基处于去质子化活性状态。

偶联反应‌

在避光条件下，将 FITC 溶液缓慢滴加至 D-赖氨酸溶液中，控制 ‌FITC/D-赖氨酸摩尔比‌ 为 1:1 至 1:2（根据标记密度需求调整）。

室温下持续搅拌反应 ‌1-2 小时‌，通过 ‌pH 维持 8.5‌ 确保反应高效进行。

反应终止与纯化‌

终止反应‌：通过超滤离心或透析（截留分子量 3.5 kDa）去除未反应的游离 FITC。

初级纯化‌：凝胶过滤层析（Sephadex G-25 柱），分离 FITC-D-Lys 与未偶联的小分子杂质。

二级纯化‌：反相高效液相色谱（HPLC，C18 柱），流动相为甲醇-水梯度体系，收集目标产物峰。

三、质量控制与保存

纯度检测‌：通过 HPLC 分析纯度（≥95%）及质谱验证分子量。

储存条件‌：产物冻干后于 -20℃ 避光保存，避免反复冻融；溶解时优先使用 DMSO 或 PBS（pH 7.4）。

关键参数与优化建议

参数 设置范围 优化目标

pH‌ 8.0-9.0（碱性缓冲液） 提升 FITC 反应活性

摩尔比‌ FITC=1:1-1:2 平衡标记效率与成本

反应时间‌ 1-2 小时 避免 FITC 水解副反应

注意事项

避光操作‌：FITC 对光敏感，全程需在棕色玻璃器皿或遮光条件下进行。

溶剂选择‌：避免使用含伯胺试剂（如 Tris 缓冲液），以防竞争性反应干扰。

生物相容性测试‌：若用于活细胞实验，需验证终产物的细胞毒性（如 CCK-8 法）。

通过上述步骤，可高效合成高纯度 FITC-D-Lys，满足蛋白质标记、细菌成像等多种研究需求。

以上资料由小编zhn提供，仅用于科研

关于我们 ：

西安齐岳生物科技有限公司是一家专注于生物医药和纳米材料研发、生产与销售的高新技术企业。公司致力于为科研院所、高校以及医药企业提供高品质的生化试剂、功能材料和定制化服务。主要产品涵盖蛋白质/多肽类纳米材料、靶向药物递送系统、脂质体包封材料、PEG修饰载体、荧光探针、量子点等，广泛应用于药物研发、分子影像、细胞标记及诊疗一体化等领域。公司支持定制合成与技术支持服务，满足客户多样化科研需求。

相关产品：                  

8-HQ羟基氧修饰的葡萄糖前药（Glc-1～Glc-4）

二硫键的Pluronic-SS-RH聚合物前药

DOX@Fc-SS-ATRA NPs；二茂铁-SS-反式维甲酸负载药物阿霉素

PC-Pt/Ce6 NP；光敏剂二氢卟吩e6负载四价顺铂前药

前药喜树碱-酮缩硫醇-阿霉素；CPT-TK-DOX

Pt/BSO-MS-HA；透明质酸包被介孔二氧化硅负载L-丁硫氨酸亚砜胺和顺铂前药

将2-羟乙基二硫基修饰的喜树碱前药；CPT-SS-OH

甲氧基聚乙二醇-b-聚谷氨酸共聚物负载阿霉素前药；PEG-SS-PG/DOX

活性氧敏感的二聚体紫杉醇前药纳米递送系统 di PTK@DP

ROS敏感的高分子前药mPEG-TK-PTX

双氢青蒿素-3-甲基腺嘌呤前药纳米脂质体；AS-3-MA

肝素修饰的双氢青蒿素-3-甲基腺嘌呤前药纳米脂质体；HAMLs