iFluor 532羊抗兔免疫球蛋白(H+L)的化学反应原理
iFluor 532 羊抗兔 IgG(H+L)是一种以 iFluor 532 荧光染料标记的多克隆抗体,专一性识别兔源IgG的重链(Heavy)与轻链(Light),应用于间接免疫荧光、免疫印迹和免疫组化中,用于检测兔源一抗。其化学反应原理主要涉及荧光染料与抗体之间的共价修饰过程。
染料修饰原理:iFluor 532 通常以NHS酯活性形式与抗体反应。NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)酯能选择性与抗体赖氨酸残基上的胺基反应,形成稳定的酰胺键。反应一般在pH 7.5~8.5条件下进行,在此范围内胺基呈去质子化状态,反应效率高且副反应少。
反应控制参数:
摩尔比:控制染料与抗体的反应摩尔比对终荧光强度和免疫活性至关重要。过高的标记度可能导致荧光猝灭和抗体构象破坏。
反应时间与温度:通常在4°C至室温下反应1–2小时,以获得较温和的反应条件,保持抗体活性。
缓冲体系:避免使用胺类缓冲液(如Tris),优选PBS或碳酸盐缓冲液,以免与NHS酯竞争反应。
抗体识别特异性:标记过程保持了IgG抗体识别兔IgG重链和轻链的双重能力,使其适用于识别未被还原的IgG以及还原状态下的抗体片段,适用于多种检测环境。
光学与功能特性:iFluor 532 发射绿色荧光,适合与其他荧光探针(如DAPI、Cy5)联用进行多重染色。染料与抗体的连接位点分散,有效避免了空间位阻对抗原结合位点的干扰。
抗原检测机制:在免疫染色中,iFluor 532 羊抗兔二抗通过与兔源一抗结合,实现抗原-抗体复合物的荧光可视化,借助激光共聚焦或流式细胞技术对目标抗原进行定量与定位分析。
综上,iFluor 532 羊抗兔 IgG(H+L)通过高效的共价染料修饰技术,保持抗体特异性和生物活性,适合多种免疫检测技术中的标记。
产品名称:iFluor 532羊抗兔免疫球蛋白(H+L)
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
齐岳生物供应各种荧光染料,包括CY系列、FITC、Rhodamine、Bodipy系列染料、Coumairn 染料、Dansyl染料、FAM/5-TAMRA、NBD、ICG及IR系列、ATTO系列染料、AMCA、Perylene、碘化物、DIR/DIL/DIO/DID/DAPI细胞膜染料等等,提供各种荧光(CY系列、FITC、香豆素、罗丹明等)荧光染料标记的定制服务
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