iFluor 532羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)的纯化与表征
iFluor 532 羊抗鼠 IgG(H+L)是一种经过荧光标记的多克隆二抗,常用于检测小鼠来源的一抗(IgG)。该抗体在制备过程中经过染料标记、纯化和多项表征工艺,确保其在细胞免疫染色、Western blot 和组织切片等应用中具备稳定的荧光强度与高特异性。
标记反应后的纯化流程:
透析或凝胶过滤:反应结束后需去除游离未反应的 iFluor 532 染料,以免影响背景信号和非特异性结合。常用的手段包括透析、Sephadex G-25 凝胶层析或超滤浓缩等。
抗体浓度和标记度评估:通过紫外-可见分光光度法,分别在280 nm(蛋白吸收)和530 nm(染料吸收)测量吸光度,计算抗体浓度和染料/抗体摩尔比(DOL,Degree of Labeling)。
质量控制与表征方法:
SDS-PAGE分析:用于验证抗体的完整性、重链与轻链的纯度及标记后是否存在聚集或降解。
抗原结合能力检测:采用ELISA或点杂交等免疫检测法验证其与小鼠IgG的结合效率,确保不因染料修饰影响抗体功能。
荧光性能检测:利用分光光度计和荧光分光仪评估发射峰强度、光稳定性、荧光寿命等参数。
产品稳定性:iFluor 532 标记的抗体通常在含有BSA和甘油的PBS缓冲液中保存,以防冻融降解和氧化。光敏性要求避光储存,4°C下稳定保存数月至一年。
应用性能表征:
在流式细胞术中测试荧光强度与信噪比;
在免疫组化(IHC)染色中验证其靶向性和组织穿透能力;
通过共聚焦显微镜分析其胞内定位与荧光一致性。
产品名称:iFluor 532羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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