iFluor 532-streptavidin conjugate，绿色荧光染料iFluor 532链霉亲和素的合成步骤概述

iFluor 532-Streptavidin 是将明亮的绿色荧光染料 iFluor 532 与高亲和力的链霉亲和素（Streptavidin）通过共价方式结合的荧光探针，用于生物素标记抗体或分子的检测，在免疫荧光染色和流式细胞术中尤其常用。该偶联物的合成过程通常包括以下几个关键步骤：

链霉亲和素的预处理：链霉亲和素作为一种四聚体蛋白，需在温和条件下进行反应以保持其生物素结合活性。首先将其溶解在碳酸盐缓冲液（pH 8.3）或磷酸盐缓冲液中，为接下来的染料修饰提供理想反应环境。

活性染料的加入：使用 iFluor 532-NHS ester（N-羟基琥珀酰亚胺酯形式）作为荧光标记物。NHS 酯能够特异性地与链霉亲和素表面赖氨酸残基上的伯胺基发生亲核取代反应，形成稳定的共价酰胺键。反应通常在室温下避光进行 1~2 小时。

染料与蛋白质的摩尔比控制：为获得佳的荧光强度和结合能力，需控制染料与链霉亲和素的摩尔比。一般保持 DOL（Degree of Labeling）在 3~5 范围，以避免染料过度标记引起的构象破坏或聚集。

去除游离染料：反应结束后使用透析、超滤或凝胶过滤（如 Sephadex G-25）等手段去除未反应的自由染料，确保终产物的纯度和性能。

质量检测：通过分光光度法测定蛋白浓度与染料吸收，计算 DOL 值。同时使用 SDS-PAGE 验证蛋白完整性，避免聚合物或降解产物的干扰。

终产品 iFluor 532-Streptavidin 可在冷藏条件下长期稳定保存，具有高亮度、低背景和良好水溶性，适合用于荧光共聚焦、流式分析、多重染色等多种实验平台。

产品名称：iFluor 532-streptavidin conjugate

纯度：95%+

性状：基于不同的分子量，呈白色 / 类白色固体，或液体。

溶剂：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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