Fluorescein-Fibronectin,FITC-纤连蛋白的合成步骤概述
Fluorescein-Fibronectin是将荧光素异硫氰酸酯(FITC)共价偶联至纤连蛋白分子上的标记产物,常用于细胞培养、细胞外基质研究及细胞粘附机制探索。其合成步骤如下:
原料准备
高纯度的纤连蛋白溶液通常溶解于碳酸氢钠缓冲液或PBS缓冲液(pH 8.5-9.0),以保证蛋白质处于适宜的状态,氨基基团活性。
FITC溶解
FITC通常溶解于干燥的DMSO或乙醇中,制备高浓度储备液,确保偶联反应的有效进行。
偶联反应
将FITC储备液缓慢加入到纤连蛋白溶液中,搅拌反应,控制温度(一般在4℃至室温),避免蛋白质变性。反应时间通常控制在1至4小时内,根据反应动力学调整。
反应终止
通过加入过量的胺类缓冲剂(如甘氨酸)封闭剩余的异硫氰酸酯基团,防止非特异性标记。
纯化处理
利用透析、凝胶过滤或超滤技术去除未结合的FITC和低分子杂质,得到纯净的FITC-Fibronectin。
质量检测
测定蛋白浓度和荧光强度,评估标记效率。利用SDS-PAGE联合荧光成像确认标记蛋白的完整性和均一性。
保存条件
纯化后的FITC-Fibronectin一般储存在低温(4℃或-20℃)避光条件下,保持其稳定性和生物活性。
产品名称:Fluorescein-Fibronectin,FITC-纤连蛋白
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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