CY5.5-ConA,花菁染料CY5.5标记刀豆蛋白A的制备方法
CY5.5-ConA是将近红外荧光染料CY5.5共价标记于刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)上的复合物,适用于细胞糖链识别、细胞膜糖蛋白标记及生物成像研究。
制备方法:
原料准备:
高纯度ConA蛋白,具有多个赖氨酸残基,表面带有自由氨基。
CY5.5-NHS酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯),作为活性标记染料,能与蛋白氨基发生酰胺键反应。
缓冲体系选择:
使用pH约7.4的磷酸盐缓冲液(PBS),保持蛋白稳定且利于NHS酯反应。避免使用含有初级胺的缓冲液,以免竞争反应。
偶联反应:
将CY5.5-NHS酯溶解于DMSO或DMF中,缓慢加入ConA蛋白溶液中,控制反应摩尔比(通常1:3至1:10),室温下反应1-2小时。该反应通过NHS酯与蛋白氨基形成稳定的酰胺键,实现标记。
纯化步骤:
反应后,采用透析或凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)去除游离未反应的染料,确保产品纯净。高效液相色谱(HPLC)或SDS-PAGE结合荧光检测用于产品鉴定。
浓缩与储存:
纯化后的CY5.5-ConA浓缩至适用浓度,添加适量甘油或抗冻剂,置于-20℃或-80℃保存,避免光照引起的荧光淬灭。
质量控制:
检测标记度(DOL),确认染料与蛋白的结合比例。使用荧光光谱验证染料发射性能,确保生物活性保留。
通过上述步骤制备的CY5.5-ConA,兼具ConA的特异糖识别能力和CY5.5的高灵敏近红外荧光性能,适合细胞膜糖基结构研究及动态成像。
产品名称:CY5.5-ConA,花菁染料CY5.5标记刀豆蛋白A
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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