荧光染料CY5.5-岩藻多糖/褐藻糖胶，CY5.5-Fucoidan的反应条件

CY5.5-Fucoidan 为将 Cyanine5.5（CY5.5）染料与岩藻多糖（Fucoidan）分子共价连接的中远红外荧光探针，兼具 Fucoidan 的生物活性与 CY5.5 在 650–900 nm 成像窗口的高信噪比。Fucoidan 含多处硫酸酯和羧酸基位点，需通过化学衍生引入可与 CY5.5 反应的官能团。

常用反应方案：

引入胺基：Fucoidan 在 MES 缓冲（pH 5.5）中与 EDC/NHS（摩尔比 1:1.2:1.2）活化羧基，随后加入过量乙二胺，生成 Fucoidan-NH₂；

偶联反应：在 PBS（pH 7.4）中将 Fucoidan-NH₂（5 mg/mL）与 CY5.5-NHS（摩尔比约 1:0.05）于 4 °C 避光反应 6–12 小时；

纯化：用超滤离心（MWCO 30 kDa）浓缩并去除游离染料，再透析（MWCO 3.5 kDa）彻底洗脱小分子，终冻干得到灰紫色粉体。

关键反应条件与优化：

pH 控制：偶联反应佳 pH 为 7.2–7.8，过碱环境会加速 NHS 酯水解，过酸则影响胺基活性；

温度与时间：4 °C 可减缓副反应，保证多糖链稳定；反应时间 6–12 小时为宜，过长会导致染料水解；

染料/多糖比：控制在 0.03–0.1（摩尔比）可获得 2–5 个染料/100 kDa 的标记度；

去除游离染料：多次超滤与透析可使游离 CY5.5 含量降至＜5%（UV/Vis 检测）。

表征方法包括：

UV/Vis 光谱：在 675 nm 处出现 CY5.5 吸收峰，A₂₇₅/A₆₇₅ 比值反映标记度；

荧光光谱：激发 675 nm，发射 695–720 nm；

¹H NMR：可见多糖主链信号与 CY5.5 苯并环信号共存；

GPC：标记后分子量分布略有右移，表征偶联效率；

细胞实验：在 HeLa、RAW264.7 等细胞中 10–50 μg/mL 浓度孵育 1–4 小时，荧光显微镜下可清晰观察胞内信号，无明显细胞（CCK-8 实验）。

产品名称：料CY5.5-岩藻多糖/褐藻糖胶，CY5.5-Fucoidan

纯度：95%+

性状：基于不同的分子量，呈白色 / 类白色固体，或液体。

溶剂：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.05.23