文献：Liver-Targeted Combination Therapy Basing on Glycyrrhizic Acid-Modified DSPE-PEG-PEI Nanoparticles for Co-delivery of Doxorubicin and Bcl-2 siRNA

文献链接：https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=13620650816s00y0k60q02j0k0742988&site=xueshu_se

作者：G Tian，R Pan，B Zhang，M Qu，J Wu

制备普通胶束和CCR2靶向胶束如下：

将mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE/DiD（98/2/0.5）溶解在氯仿中，并与溶解在甲醇中的CCR2拮抗剂混合。将小分子拮抗剂CCR2以1:22的摩尔比加载到脂质胶束中，相当于4.5%w/w的加载量。通过旋转蒸发去除溶剂，得到脂质膜。

用PBS对干燥的薄膜进行再水化。

胶束含有远红色荧光亲脂性DiD，在再水化时，DiD会结合到胶束的亲脂性区域。然后在室温下将mPEG-DSPE膜和mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE混合物超声处理5分钟。mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE混合物与抗CCR2抗体一起孵育4小时，以与NHS-PEG-DSPE脂质结合。PEG-DSPE胶束含有0.3摩尔%的抗CCR2抗体。

使用Nanobrook Omni（Brookhaven Instruments，Holtsville，NY，USA）通过动态光散射（DLS）测量了普通胶束和CCR2靶向胶束的粒径和ζ电位。

通过流式细胞术测量DiD标记的CCR2靶向和平胶束与RAW 264.7细胞的结合和内化。共有106个细胞在4°C下与胶束一起孵育1小时，并在测量前洗涤三次。来自Miltenyi Biotec的MACSQuant用于644/663 nm ex/em波长的流式细胞术。

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