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DSPE-PEG-VS 介导的抗体定向偶联策略

发布时间：2025-06-27 作者：kx 分享到：

DSPE-PEG-VS 介导的抗体定向偶联策略

链接：https://www.cell.com/molecular-therapy-family/molecular-therapy/fulltext/S1525-0016(05)00162-0

作者：安妮特 ·威尔逊，亨特，肖恩· 阿尔伯，唐志，史蒂文· 肯内尔，西蒙· 沃特金斯，叶黄，布鲁斯· 皮特，宋丽

摘要：

肺内皮在维持正常肺部生理功能方面发挥着重要作用，其功能障碍与多种肺部疾病有关。通过反义寡脱氧核苷酸 (ODN) 纠正内皮功能障碍依赖于开发一种能够高效地将 ODN 递送至肺内皮且毒性*小的递送载体。为此，我们开发了一种新型脂质载体，能够高效地将 ODN 靶向递送至肺内皮。该方法基于一种利用可离子化的氨基脂质（1,2-二油酰-3-二甲基丙烷铵）和含乙醇的缓冲体系将大量多聚阴离子 ODN 包裹在脂质囊泡中的方法。内皮特异性*体 (273-34A) 通过二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇间隔物被整合到脂质囊泡中。 273-34A*体在体外和体内均能有效介导ODN递送至小鼠肺内皮细胞。此外，该制剂的全身给药具有*低的血液学毒性，且几乎不会引起全身和肺部血液动力学的急性变化。这些结果为脂质介导的ODN递送用于*肺部疾病奠定了基础。此外，该方法还可作为表征肺内皮细胞基因功能的研究工具。

材料和方法

脂质和化学物质

EPC、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N- [甲氧基（聚乙二醇）2000]、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 (DSPE) 和 DODAP 购自 Avanti Polar Lipids, Inc.（美国阿拉巴马州阿拉巴斯特）。CH、3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯 (SPDP)、二硫苏糖醇 (DTT)、大鼠 IgG 和细菌（大肠杆菌）LPS 购自 Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）。α-乙烯基砜、聚乙二醇-丙酸的 ω- N-羟基琥珀酰亚胺酯 MW 3400 (NHS-PEG-VS) 购自 Shearwater Polymers（美国阿拉巴马州亨茨维尔）。 DSPE-PEG-VS（MW 2507）按照之前的方法合成[39]。

*体

使用大鼠*鼠TM (273-34A) 作为特异性配体，其制备方法参见[30]。以正常大鼠IgG作为对照配体。大鼠*鼠ICAM-1单克隆*体YN1/1购自eBioscience公司（美国加利福尼亚州圣地亚哥）。Alexa Fluor-488山羊*鼠IgG购自Molecular Probes公司（美国俄勒冈州尤金）。

寡核苷酸

所有ODN均以硫代磷酸酯骨架合成，但用于核酸酶分析的ODN除外，该ODN以PO骨架合成（美国德克萨斯州米德兰市米德兰认证试剂公司）。用于摄取和分布研究的ODN由Cy3标记的ODN与未标记的ODN组成，比例为1:4（w/w）。

含ODN的脂质囊泡的制备

按照Semple等人 [20]描述的方法制备含ODN的脂质囊泡。简而言之，在100%乙醇中制备由EPC:CH:DODAP [25:52:20 (m/m)]组成的脂质溶液。为了制备*体靶向脂质囊泡，将3 mol%的DSPE-PEG-VS添加到脂质中。在单独的试管中，用300 mM柠檬酸（pH 4.0）制备ODN。预热溶液，然后将脂质溶液缓慢添加到ODN中，直至乙醇的*终浓度为40% (v/v)。ODN:脂质的输入比为0.15 (w/w)。将混合物通过100 nm聚碳酸酯滤膜。将制剂对pH 4.0的柠檬酸盐缓冲液进行透析，并进一步对pH 7.6的Hepes缓冲液进行透析。*后通过凝胶过滤将含有ODN的脂质囊泡与游离ODN分离，并按文献[9]的方法测定囊泡的大小和ζ电位。

*体（Ab）硫醇化并与脂质囊泡偶联

通过与SPDP反应制备硫醇化*体。然后用DTT处理还原*体上的PDP基团。将含有DSPE-PEG-VS的脂质囊泡与硫醇化*体在22°C下孵育2小时，然后在4°C下孵育过夜，并轻轻搅拌。通过凝胶过滤去除未结合的*体。

DSPE-PEG-VS