文献：iRGD通过增强胃癌淋巴细胞浸润与PD-1敲除免疫疗法产生协同作用

链接：https://www.nature.com/articles/s41467-019-09296-6

作者：丁乃清,邹正云,沙惠子,舒苏,钱汉清,孟凡艳,陈方军,杜世耀,周淑娟,陈红张莲如,鞠阳贾伟&刘宝瑞 

节选：

DSPE-PEG-iRGD修饰T细胞

为了将iRGD固定在T细胞膜上，我们在肽的C末端引入了一个半胱氨酸残基。游离的巯基使得iRGD能够通过迈克尔加成反应连接到2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺-N-马来酰亚胺（DSPE-PEG-Mal）的马来酰亚胺基团上（图 1a）。MALDI-TOF和1 H NMR分析表明成功制备了DSPE-PEG-iRGD（图 1b和补充图 1a）。采用相同方法构建了DSPE-PEG-iRGD-FAM，用于某些实验。结果表明，所得 DSPE-PEG-iRGD-FAM 在共培养过夜后能自发地从溶液转移到 T 细胞表面（图 1c和补充图 1b），而不会影响细胞活力、表型或效应功能（补充图 2a-e）。此外，20 µg DSPE-PEG-iRGD 可 100% 覆盖 10 6 个活化的 T 细胞（图 1d和补充图 1c）。由于结合稳定性是细胞表面修饰的关键参数，我们研究了 DSPE-PEG-iRGD-FAM 的细胞表面动力学。培养 60 小时后，DSPE-PEG-iRGD-FAM 修饰的 T 细胞的相对荧光强度下降至 50%，这大约是淋巴细胞的倍增时间（图 1e）。该结果表明我们所应用的细胞表面改性平台具有良好的稳定性。

DSPE-PEG-iRGD的合成及其细胞表面修饰。a脂质偶联iRGD的合成示意图。b MALDI -TOF表征DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-iRGD构建体。分子量的差异表明iRGD和DSPE-PEG-Mal成功连接。c单独的T细胞（灰色）以及与iRGD-FAM（蓝色）和DSPE-PEG-iRGD-FAM（红色）孵育的细胞的流式细胞术直方图。d使用流式细胞术分析DSPE-PEG-iRGD-FAM修饰细胞的百分比。e 使用流式细胞术分析培养期间FAM-DSPE-PEG-iRGD修饰细胞的相对平均荧光强度的变化。数据表示平均值±标准差；n  = 3. T + iRGD，T 细胞与游离 iRGD 共同给药；T-iRGD，经 DSPE-PEG-iRGD 修饰的 T 细胞

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