产品名称:SCM-PEG-Biotin的纯化与表征
关键反应条件
溶剂选择:
无水DMF或二氯甲烷(DCM),避免水分导致SCM或羟基水解。
pH控制:
SCM活化步骤需pH 7-9(避免碳酸酯质子化),生物素与PEG连接步骤需pH 8.0(促进NHS酯反应)。
温度与时间:
氯甲酸酯反应需室温进行,反应时间4-6小时。
反应后需通过透析或凝胶过滤去除未反应试剂。
纯化与表征
纯化方法:
制备型HPLC纯化(C18柱,乙腈/水梯度洗脱),收集主峰产物。
透析(截留分子量1 kDa)去除未反应试剂(适用于低分子量杂质)。
表征方法:
质谱(MS):确认分子量(理论MW≈SCM部分(161 Da)+ PEG部分(如2000 Da)+ Biotin部分(244 Da)≈2405 Da)。
NMR:检测生物素的噻吩环质子(δ 4.3-4.5 ppm)、PEG的亚甲基质子(δ 3.5-3.8 ppm)和SCM的琥珀酰亚胺质子(δ 2.6-2.8 ppm)。
红外光谱(IR):观察SCM的C=O伸缩振动(1740-1780 cm⁻¹)和生物素的噻吩环振动(1500-1600 cm⁻¹)。
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