5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯（5(6)-CFDA-SE）是一种荧光探针和生物标记试剂，常用于细胞增殖追踪、细胞活性分析以及细胞归巢实验。它结合了几种关键的功能基团：荧光素（Fluorescein）的荧光特性、二乙酸酯基团的细胞膜通透性，以及琥珀酰亚胺酯（NHS酯）的活泼偶联性能。凭借这些特性，5(6)-CFDA-SE成为流式细胞术、荧光显微镜以及多种生物实验中不可或缺的工具。

常用名 5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA)

英文名 5-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester

CAS号 150347-59-4

分子量 557.461

密度 1.6±0.1 g/cm3

沸点 757.9±70.0 °C at 760 mmHg

分子式 C29H19NO11

熔点 152-154ºC(lit.)

闪点 412.2±35.7 °C

工作原理与反应机制

5(6)-CFDA-SE的核心应用机制基于以下几个步骤：

1. 膜通透性

二乙酸酯基团使分子疏水，能够轻松穿透细胞膜，进入细胞内部。

2. 酯酶切割

进入细胞后，胞内酯酶迅速水解二乙酸酯基团，释放出羧基荧光素，产生带负电荷的极性分子，困留在细胞内，无法自由扩散出去。

3. NHS酯偶联

羧基荧光素在细胞内与蛋白质中的伯胺基团（例如赖氨酸残基）发生共价结合，形成稳定的酰胺键。这种共价标记确保荧光信号在细胞内长期保留。

这种多步骤机制是CFDA-SE相对于其他荧光染料的重要优势，使其能够长期追踪细胞，而不被洗脱或稀释。

主要应用

细胞增殖分析

流式细胞术常用5(6)-CFDA-SE对细胞进行荧光标记，通过检测荧光强度的减半来定量分析细胞的分裂次数。

细胞迁移与归巢研究

在动物模型中，标记后的细胞可以追踪其迁移和定位，用于研究免疫细胞、干细胞在体内的分布。

细胞活性检测

用于检测细胞存活、细胞膜完整性以及酯酶活性，是活细胞检测的重要指标。

细胞形态学研究

高亮度荧光信号适合共聚焦显微镜下观察细胞形态和分布。

多色染色

由于其激发/发射光谱不同于其他常用染料（如PE、APC），CFDA-SE可与多种荧光探针组合，实现多色标记。

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